Cepa C924 fluorescente mediante marcaje molecular para estudios de mecanismos de acción

En el CIGB Camagüey, Cuba, se aisló a partir de la rizosfera de plantas la cepa bacteriana C924, clasificada posteriormente como Brevibacterium celere. Esta cepa mostró potencialidades como estimulador del crecimiento vegetal, así como en el control biológico de nematodos. Sin embargo, se establece como necesidad dilucidar el mecanismo de acción de esta cepa en la interacción que establece con las plantas. Para lograr entender este fenómeno se propone como estrategia la construcción de un vector que porte el gen reportero de la proteína roja fluorescente DsRed para marcar la cepa C924, como herramienta de estudio. Con este fin se emplearon los plásmidos: pTNR-KA como receptor de construcciones y el pK7WG2-R como donador del gen de interés. Se logró obtener un vector intermediario pTNR-KAi-DsRed, con el cual se transformaron genéticamente las células quimiocompetentes de E.coli DH5α. Se obtuvieron ocho colonias de E. coli DH5α transformadas. Se logró insertar el casete Pnit-DsRed-thcA HindII del vector intermediario en el sitio HindIII del MCS (Sitio Múltiple de Clonación por sus siglas en inglés) nuevamente en el plásmido pTNR-KA para obtener el vector definitivo de transformación de C924. Mediante la secuenciación del casete de expresión Pnit-DsRed-thcA de 1,1 Kb se comprueba la existencia del promotor Pnit, del terminador thcA y el gen DsRed. Se estableció una metodología de transformación para la cepa C924 y se obtuvo expresión de la proteína fluorescente recombinante.