Método de Preparação de Fatias Hipocampais para Avaliação Integrada de Eletrofisiologia e Imunofluorescência

Modelos animais, em especial os modelos in vitro de fatias de cérebro e hipocampo, são fundamentais para a pesquisa em neurociências, pois permitem elucidar mecanismos neuronais e suas bases patológicas em condições controladas. Contudo, é essencial desenvolver estratégias que reduzam o número de animais utilizados, em conformidade com os princípios dos 3Rs (Replacement, Reduction, RefinementSubstituição, Redução, Refinamento). ( Neste estudo, apresentamos um método que combina a perfusão transcardíaca utilizando fluido cerebrospinal artificial protetor modificado contendo sacarose (SP-mACSF) à ressecção de fatias de hipocampo. O sucesso dessa abordagem reside na capacidade do SP-mACSF em promover uma lavagem vascular eficiente, permitindo tanto a viabilidade tecidual para a realização de gravações eletrofisiológicas quanto a obtenção de imagens de imunofluorescência de alta qualidade para análises de histologia, a partir do mesmo tecido. Para o desenvolvimento e validação desse método, foram utilizadas fatias de 400 um de espessura obtidas de ratos machos da linhagem Wistar. As fatias provenientes de animais perfundidos com SP-mACSF exibiram atividades epileptiformes não-sinápticas no giro dentado indistinguíveis das dos controles em todos os aspectos avaliados. As ressecções de 40 um produzidas a partir das fatias de 400 um, após fixação em paraformaldeído proporcionaram marcações anti-GFAP bem definidas, isentas de artefatos e com baixa autofluorescência no grupo SP-mACSF quando comparadas às do grupo Controle. Este método inovador representa um avanço significativo para a neurociência, consolidando a aplicação dos princípios dos 3Rs ao permitir a correlação direta entre dados funcionais e estruturais, com a extração de dados multifatoriais de um único animal, promovendo uma prática científica mais sustentável, ética e metodologicamente integrada.