Estandarización de técnicas analíticas para la cuantificación de metabolitos en sobrenadantes de cultivo de la etapa de fermentación para obtener el ingrediente farmacéutico activo (IFA) de la vacuna Porvac.

El cultivo de células HEK293 transformadas para que expresen la proteína E2CD (HEK293/E2CD), es realizado en el CIGB Camagüey, para la obtención del Ingrediente Farmacéutico Activo (proteína E2CD) de la vacuna Porvac. El control analítico del proceso de estos cultivos celulares en los fermentadores, es una debilidad que posee el proceso actual en cuanto al  conocimiento y control de la dinámica de consumo y expresión de metabolitos que tienen una incidencia directa sobre la viabilidad celular y la expresión de proteína específica. En este trabajo se presentan los resultados de estandarización de tres técnicas analíticas para cuantificación de lactato, amonio y azúcares reductores totales aplicadas a muestras del proceso de fermentación en la obtención del Ingrediente Farmacéutico Activo (proteína E2CD) de la vacuna Porvac, realizadas en cultivos  por lotes (Batch). Se escogieron, el método de colorimetría con separación química previa en la cuantificación del metabolito lactato, el método analítico fenol sulfúrico en la cuantificación de azúcares totales y la cuantificación del metabolito amonio mediante la utilización del reactivo de Nessler. Se conoce que en la etapa de fermentación se consumen como fuentes principales de carbono glutamina y glucosa, y se generan metabolitos tóxicos para las células, principalmente lactato y amonio. Se obtuvo una relación teórico-práctica entre estos tres analitos en estudio, conociéndose con mayor exactitud la dinámica de consumo o generación de estas sustancias durante el proceso lo que permitirá posteriormente el estudio de su influencia sobre parámetros críticos de control como el pH y la generación de producto específico.