En 2,1 kg, kastrerad, 10-årig Yorkshire Terrier-hund togs in på ett lokalt sjukhus med dyspné. Närvaron av perikardvätska bekräftades med ultraljud, som sedan samlades in under ultraljudsriktning, och perikardvätskans fysiska och kemiska egenskaper undersöktes för att fastställa dess egenskaper. Bakterie- och svampodlingstesterna gav negativa resultat, vilket indikerar ingen tillväxt. Det fanns inga avvikelser i fullständig blodbild och serumkemik. Patienten remitterades till Kangwon National University Veterinary Teaching Hospital. Totalt 30 ml perikardvätska samlades från området där det observerades under ultraljudsriktning med lokalbedövning; 1 mg/kg (0,2 ml) alfaxalon administrerades intravenöst, följt av ytterligare 0,1 ml. Efter 10–15 min administrerades 4 ml 2 % lidokain utspätt i saltlösning (1:1). Blodig perikardvätska smetades och cytologisk undersökning utfördes. Vid cytologisk undersökning observerades binucleation, anisocytos, anisokaryosis, onormala nucleoli (stora, kantiga och flera), riklig basofila cytoplasma, högt kärn-cytoplasmatiskt förhållande (N:C) och grovt kromatin samt stora atypiska multinucleat celler, vilket indikerar hög grad av malignitet. Dessa celler kan finnas antingen som enskilda eller som klumpar av aggregat med ett antal erytrocyter. Ett stort antal icke-degenerativa neutrofiler och makrofager observerades tillsammans med dessa celler. Erythrophagia observerades, vilket indikerar kronisk hemorragia. Att skilja mellan reaktiva mesotelialceller och mesoteliom i perikardvätskan är en utmaning, särskilt i närvaro av neutrofil-rik inflammation. Därför ville författaren upptäcka om de observerade cellerna var reaktiva mesotelial-, mesoteliom- eller adenocarcinomceller via immuncytokemi med användning av fem markörer (cytokeratin, vimentin, desmin, E-cadherin och kalretinin) [, –] Immuncytokemi utfördes genom att modifiera den metod som rekommenderades av antikroppstillverkarna; mesoteliomceller som positiv kontroll för var och en av de primära antikropparna förbereddes från lagrade cellsprej, som samlades in från en hundpatient som diagnostiserades med mesoteliom efter döden. Vid den tidpunkten, var mesoteliomcellerna utspädda och fixerade i metanol i 10 min och lagrades i en glasburk innehållande 1x fosfatbuffrad saltlösning (PBS) vid 4 ℃ i flera månader. För kalretinin- och E-cadherin-färgning, fixerades cellutstryken från perikardiella effusioner i metanol vid -20 °C i 10 min och tvättades tre gånger med PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA) i 2 min. De primära antikropparna mot kalretinin (1:1000, Sigma C7479; värd: kanin; reaktivitet: människa, mus, hund) och anti-E-cadherin, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; värd: råtta; verifierad reaktivitet: cynomolgus, hund, gris), späddes med 1% bovint serumalbumin (BSA)/PBS (Komabiotech, Seoul, Sydkorea). Efter inkubation över natten med de primära antikropparna vid 4 °C, tvättades utstryken tre gånger i PBS i 2 min. Den sekundära antikroppen Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) goat anti-rabbit immunoglobulin G (IgG; heavy + light chain [H + L]) späddes med 1% BSA/PBS. Efter inkubation över natten med de sekundära antikropparna vid 4 °C, tvättades utstryken tre gånger i PBS i 2 min. Utstryken färgades sedan med monteringsmedium innehållande DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) och undersöktes med ett LSM 780 laser-scanning konfokalt mikroskop (Carl Zeiss, Jena, Tyskland). För cytokeratin- och vimentinfärgning användes monoklonalt antikroppspan cytokeratin (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, USA), monoklonalt vimentin-antikropp (V9) och fluorescein (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); samma protokoll (färgningsmetod eller tid som krävs) som beskrivs ovan utfördes med användning av en annan sekundär antikropp. För desminfärgning användes desmin monoklonalt antikropp (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) som en primär antikropp och Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) get anti-mus IgG (H + L) användes som en sekundär antikropp. Samma procedurer som de som beskrivs ovan utfördes. Immuncytokemi av perikardvätska var positiv för vimentin och cytokeratin. DAPI och den sammanslagna bilden av Fig. A-C visas i Fig. D. Det var också positivt för desmin. DAPI och den sammanslagna bilden av Fig. E, F visas i Fig. G, H. Slutligen var det positivt för kalretinin och E-cadherin. DAPI och den sammanslagna bilden av Fig. A-C visas i Fig. D. Därför diagnostiserades malignt mesoteliom [,, –].