5-недельный щенок, помесь хаски, был доставлен в службу неотложной помощи Ветеринарного медицинского центра Университета Саскачевана с однодневным анамнезом аномального неврологического поведения, включая кружение, атаксию, вокализацию и заторможенное мышление. При осмотре у щенка было заторможенное мышление, двустороннее отсутствие угрозы, нормальный ответ зрачков на свет, присутствовал рвотный рефлекс и не было отмечено других дефицитов черепно-мозговых нервов. Щенок кружился влево и имел атаксический походку. Не было отмечено других значительных неврологических результатов. Нейроанатомическая локализация была связана с многоочаговыми поражениями центральной нервной системы в пределах предчерепной и стволовой части мозга. Местное общество защиты животных получило эту суку и ее 8 щенков из Северного Саскачевана; мать была вакцинирована по прибытии в приют. Через семь дней после этого щенки были вакцинированы модифицированной живой вакциной (Nobivac 1 DAPPC, Merck Animal Health) после того, как все щенки дали отрицательный результат на собачий парвовирус с помощью иммуноферментного анализа (тест SNAP Parvo, IDEXX Laboratories, Маркхэм, Онтарио). Все остальные щенки и сука были бессимптомными, за исключением одного щенка, который был доставлен в VMC за один день до появления здесь щенка с трехмесячной историей летаргии, усиленных дыхательных усилий и двустороннего серозного носового выделения. Было подозрением инфекция верхних дыхательных путей. Был назначен амоксициллин (Apotex Inc.; Торонто; Онтарио) 22 мг/кг перорально каждые 12 часов в течение 10 дней, и щенка выписали с инструкциями немедленно отлучить от матери и изолировать от других щенков. Не было отмечено никаких неврологических аномалий ни у этого, ни у любого другого щенка в любой момент времени. Этот щенок был помещен в изоляцию по прибытии на основании подозрений на наличие основного инфекционного заболевания, включая возможный собачий грипп. Было получено согласие от местного общества защиты животных на проведение диагностики и оказание поддерживающей терапии. Внутривенно были введены жидкости Normosol R (Hospira, Montreal, QC) в дозе 4 мл/кг/ч. Была проведена обезболивающая терапия гидроморфоном (Sandoz Inc., Boucherville, QC) в дозе 0,05 мг/кг IV q4. Чрезвычайный осмотр выявил packed cell volume of 22% (26,5–35,5), общий белок 5,8 г/дл (3,7–4,8), азот в моче крови Azotstick® (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Tarrytown, NY) в дозе 5–15 мг/дл (13,1–46,2) и глюкоза крови 10,3 ммоль/л (6,7–8,9). Полный анализ крови был также представлен в Prairie Diagnostic Services Inc. (PDS), который выявил умеренную регенеративную анемию; количество эритроцитов (RBC) 3,25 × 1012/L (5,8–8,5) и гематокрит (HCT) 0,22 л/л (0,39–0,56). Был также отмечен умеренный левосторонний сдвиг с токсическими изменениями, свидетельствующими о остром воспалении; количество лейкоцитов (WBC) 10,7 × 109/L (4,9–15,4), сегментированных нейтрофилов 8,0 × 109/L (3,0–10,0) и полос 1,0 × 109/L (0,0–0,1). Результаты анализа крови включали возрастные специфические референсные диапазоны, соответствующие данному пациенту []. Первичные дифференциальные диагнозы для неврологических признаков включали собачий бешенство, бактериальный менингит, протозойный менингит (например, токсоплазмоз) и менее вероятный возможный необычный проявление бешенства. Было начато симптоматическое лечение антибиотиками широкого спектра действия, включая Метронидазол (Бакстер, Миссиссага, Онтарио) 25 мг/кг IV q12, Пиперацилин (SteriMax Inc., Оквилль, Онтарио) 40 мг/кг IV медленно в течение 30 мин q6 и намерение вводить Клиндамицин (Intervet, Киркланд, Квебек) 12.5 мг/кг PO q12. Клиндамицин не мог быть введен, поскольку щенок быстро потерял свой рефлекс gag, а его умственные способности постепенно ухудшались в течение первых 4 часов после появления. Щенок терял и восстанавливал сознание каждую минуту и не реагировал на внешние стимулы. После дальнейшего обсуждения с местным обществом защиты животных было решено по соображениям благополучия и подозреваемого плохого прогноза умертвить щенок. Щенок был умертвлен внутривенным Пентобарбитал (Bimeda-MTC, Кембридж, Онтарио) 2 мл/4.5 кг; смерть была подтверждена сердечной аускультацией. Не было необходимости в дополнительном анестезирующем агенте из-за затуманенного сознания щенок. Щенок был умертвлен через 18 часов после появления первых клинических признаков. На следующий день в Прайри Диагностик Сервис (ПДС), Саскатун, Саскачеван, была проведена аутопсия. Состояние тела щенка было хорошим. Существенные грубые находки были отечными, пятнистыми розовыми до бледно-красных легкими и диффузно увеличенной бледно-коричневой печенью. Отек желчного пузыря не отмечался. Исследование гистопатологии было проведено на основных органах, включая мозг (мозжечок, таламус, мозжечок, мозолистый нерв, мозжечковая миелина), легкие, сердце, печень, селезенка, глаза, костный мозг, почки, лимфатические узлы и тонкие кишечники. Были обнаружены области гиперклеточности в мозге, сосредоточенные вокруг сосудов и сопровождающиеся острым кровоизлиянием, особенно в короне, таламусе, мозолистом нерве, мозжечковой миелине. Сосуды были окружены и пронизаны макрофагами, что сопровождалось отеком, небольшим количеством фибрина, некротическими воспалительными клетками и кровоизлиянием в пространстве Вирхова-Робина и прилегающем нейропиле. Несколько макрофагов демонстрировали эритрофагию. Эндотелиальные клетки были гипертрофированы и часто содержали большое количество базофильных внутриядерных включений (рисунок). Печеночные клетки были диффузно, умеренно вакуолизированы, и редко наблюдалась индивидуальная некротическая клетка. Печеночные ядра также часто содержали большие базофильные включения. Легкие альвеолы были заполнены отеком, небольшим количеством фибрина, эритроцитами, а стенки альвеол были многоочагово пронизаны макрофагами. Редко эндотелиальные клетки межальвеолярных капилляров содержали внутриядерные включения. Эндотелиальные клетки, содержащие эти внутриядерные включения, также часто наблюдались в сосудах различных органов, включая почки, костный мозг, лимфатические узлы, печень и сетчатку. Признаки сосудистого повреждения и кровоизлияния были представлены в различных формах. Основными окончательными гистопатологическими диагнозами были менингоэнцефалит с васкулитом и подозрением на вирусную инфекцию печени, основанной на наличии внутриядерных включений. Эти дифференциальные диагнозы были обусловлены вирусом Canid Alphaherpesvirus 1 (CaHV-1), вирусом Canine Adenovirus type 1 (CAdV) и вирусом собачьего гриппа (CDV). Учитывая, что щенку было больше 3 недель, инфекция собачьего герпеса считалась менее вероятной. Была проведена иммуногистохимия для аденовируса, CDV и бешенства на ткани мозга. Результаты были положительными для аденовируса и отрицательными для CDV и бешенства. Однако CDV был обнаружен методом обратной транскрипции ПЦР (IDEXX Laboratories) в пробах цельной крови, собранных до эвтаназии. Иммуногистохимическое окрашивание для обоих CAdV и CDV было выполнено на тканях мозга в PDS на автоматической платформе для окрашивания (Autostainer Plus, Dako Canada Inc., Миссиссага, ОН). Был выполнен теплоиндуцированный эпитопный ретрив, и использовались первичные антитела (антитела козы против CAdV, Virostat, Portland, ME и мышиные анти-CDV (клон DV2-12), Custom Monoclonals International, Вест Сакраменто, Калифорния) с разведением 1:4000. Был применен блокирующий реагент авидин/биотин (Vector Labs; Burlingame, CA) перед антителом CAdV. Связывание антитела CAdV было обнаружено с использованием антител козы против антител козы (Vector Labs; Burlingame, CA) и комплекса иммунопероксидазы авидин-биотин (Vector Labs; Burlingame, CA), а связывание антитела CDV было обнаружено с использованием полимерного детектирующего реагента HRP (EnVision+ System - HRP Labelled Polymer, Dako Canada Inc., Миссиссага, ОН). Окрашивание было визуализировано с использованием 3,3′-диаминобензидин тетрахлорида (DAB) (Dako Canada Inc., Миссиссага, ОН) в качестве хромогена. Антигены CDV не были обнаружены. Однако, было обнаружено множество клеток с сильным цитоплазматическим и ядерным окрашиванием для антигенов CAdV в пределах эндотелиальных клеток, что подтверждает инфекционный гепатит собак (фиг..) Было также выполнено дополнительное иммуногистохимическое окрашивание в Ветеринарной диагностической лаборатории Университета Миннесоты для выполнения специфического окрашивания для дифференциации между CAdV-1 и CAdV-2. Результаты показали, что несколько эндотелиальных клеток имели положительную иммунореактивность для CAdV-1. IHC окрашивание для CAdV-2 было отрицательным. Последующее наблюдение за пометом показало, что ни у одного из 7 других щенков не было выявлено неврологических признаков, а у щенка с респираторными признаками полностью восстановилось здоровье после приема антибиотиков. Мать и щенки находились под наблюдением в обществе защиты животных в течение 2 месяцев, прежде чем были усыновлены. Повторное обследование всех щенков спустя 5 месяцев показало, что все щенки чувствуют себя хорошо, и у них нет текущих проблем со здоровьем.