Un exemplar de vidră eurasiatică de 4 ani, născut în 2015 în „Sendaviva, Natural Park of Navarra” (42°11′31″N, 1°09′54”O) (nord-estul Spaniei), a fost transferat în 2017 în parcul natural „Terra Natura” (sud-estul Spaniei). Parcul natural „Terra Natura” este situat în zona periurbană a orașului Murcia (38°00′40″N, 1°09′54”O). Incinta pentru vidre era compusă dintr-o zonă cu adăposturi cu acces liber și un iaz cu 4 animale din această specie (2 masculi și 2 femele). Nu s-a aplicat otreapei niciun insecticid anti-țânțari. În august 2019, animalul a prezentat epistaxis bilateral, anorexie, apatie și scădere în greutate efectuat conform descrierii de către Cantos-Barreda et al. []. Pentru a testa că testul TR-IFMA validat pentru serul câinelui poate fi aplicat serului vidrei, s-a efectuat un test Western blot. Western blot-ul a fost efectuat în seruri de la vidra cu semne compatibile cu leishmania și dintr-un câine seropozitiv pentru Leishmania prin TR-IFMA. Serurile (diluție 1:2000) au fost separate în condiții de reducere pe mini geluri de poliacrilamidă (0,1% dodecil sulfat de sodiu (SDS), 12% gel de rezoluție și 4% gel de stivuire). Proteinele rezolvate au fost transferate prin electroforeză pe o foaie de nitroceluloză (Bio-Rad, SUA) și plasate într-un substrat ROTI®Lumin (Carl Roth, Germania) pentru blocare timp de 2 ore la temperatura camerei. Anticorpul policlonal anti-IgG2 de câine (AHP498; Bio-Rad, SUA) la o diluție de 1:1000 a fost folosit ca anticorp primar, în timp ce anticorpul anti-IgG2 de oaie conjugat cu peroxidază de hrean (HRP) (SAB3700702; Sigma-Aldrich, SUA) la o diluție de 1:1000 a fost folosit ca anticorp secundar pentru a detecta anticorpul primar legat. Detecția semnalului s-a făcut folosind un kit Pierce ECL2 (Pierce, Thermo Fisher Scientific, SUA) și a fost digitalizat în scanerul Typhoon 9410 (GE Healthcare, SUA). O bandă de aproximativ 150 kDa a fost observată în proba de vidră, precum și în proba de câine (vezi figura și fișierul suplimentar). Aceste constatări au confirmat că testul TR-IFMA folosind anticorpul policlonal anti-IgG2 de câine a fost capabil să detecteze IgG2 de la vidra. Testul TR-IFMA a constat într-o metodă indirectă necompetitivă bazată pe antigen recombinant biotinilat K39 ca reactiv de captare și anticorpul policlonal anti-IgG2 de câine (anticorp anti-IgG2 de câine, Bio-Rad, SUA) Eu3 +-labelat ca detector. Testul a inclus serul de la un câine seropozitiv pentru Leishmania ca control pozitiv și serul de la un câine seronegativ pentru Leishmania ca control negativ. Analiza a fost efectuată într-un contor cu mai multe etichete (VICTOR2 1420, PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Turku, Finland). Rezultatele au fost exprimate ca unități de fluorometrie pentru Leishmania (UFL). Limita de decizie a fost setată la 22 UFL. De asemenea, s-a efectuat un test de imunoabsorbție legat de enzimă (ELISA) (Leiscan® Leishmania ELISA Test, Esteve Veterinaria, Laboratorios Dr. Esteve SA, Barcelona, Spania) pentru a detecta anticorpi specifici IgG împotriva Leishmania spp. conform instrucțiunilor producătorului. Probele de ser au fost diluate 1:20 și rezultatele au fost exprimate ca raport ser/pozitiv (S/P), calculat prin densitatea optică (DO) ser/DO pozitiv. Valorile raportului S/P peste 1,1 au fost considerate pozitive. Prezența ADN-ului Leishmania spp. în sângele total și în măduva osoasă a fost evaluată prin amplificarea secvenței ADN-ului kinetoplasmului Leishmania spp. utilizând o rtPCR cu primeri și sonde descrise anterior []. Măduva osoasă a fost prelevată prin aspirație fină din joncțiunea costo-condrală și drenată într-un tub de 1 ml acoperit cu EDTA. ADN-ul a fost extras utilizând kitul de preparare a probelor PCR High Pure (Roche, Germania), urmând instrucțiunile producătorului. rtPCR-ul a fost efectuat într-un volum final de 20 μl, incluzând 1× iTaq Universal Probe Supermix (probe Bio-Rad, CA, U.S.A.), 900 nM din fiecare primer, 200 nM din sonda TaqMan, 1× Exo IPC Mix, 1× Exo IPC ADN și 50 ng ADN din fiecare probă. Parametrii ciclului au fost: 50 °C timp de 30 s, 95 °C timp de 10 min, 45 cicluri la 94 °C timp de 30 s și 55 °C timp de 1 min. Fiecare ciclu de amplificare a inclus probe pozitive și negative, iar fiecare măsurare a fost efectuată în triplicat. Pentru identificarea speciilor de Leishmania, produsele PCR din probele pozitive au fost purificate utilizând kitul de purificare a produselor PCR High Pure (Roche, Germania) și au fost supuse secvențierii la Secțiunea de Biologie Moleculară a Universității din Murcia. Secvențele obținute au fost comparate cu cele disponibile în GenBank. În plus, ca control negativ, aceleași analize au fost efectuate pe o vidră eurasiatică de trei ani din același parc natural, fără semne clinice compatibile cu leishmanioza. Toate rezultatele apar în tabel. Prezența leishmaniozei a fost confirmată și s-a administrat un tratament specific (allopurinol 15 mg/kg/24 h/p.o.). Monitorizarea tratamentului a fost efectuată în noiembrie 2019, după 3 luni de tratament. Au fost observate nefropații bilaterale cu hidronefroză, limfadenomegalie mezenterică și ascite. CBC-ul a relevat scăderi ale numărului de leucocite și scăderi ale numărului de trombocite la vidra pozitivă pentru Leishmania. Profilul biochimic seric pentru vidra pozitivă pentru Leishmania a arătat hiperproteinemie, hiperglobulinemie, scăderi ale PON-1 și creșteri ale haptoglobinei și feritinei. Analiza urinei a relevat proteinurie și scăderi ale osmolarității și gravității specifice. Prezența anticorpilor IgG2 anti-Leishmania și un rezultat pozitiv prin RT-PCR în ceea ce privește sângele integral și măduva osoasă au fost observate pentru vidra pozitivă pentru Leishmania. Secvențierea probelor pozitive a confirmat identificarea L. infantum. Secvența amplificată a prezentat o asemănare de 100% cu o secvență de referință L. infantum. În plus, microorganisme ovale cu un nucleu excentric compatibil cu amastigoții Leishmania spp. au fost observate în citologia splinei (Fig.