Un pacient de 73 de ani a fost trimis de la medicul său dentist general pentru o evaluare suplimentară a leziunii albicioase de pe gingia atașată și a peri-implantitei asociate. O vedere panoramică arată pierderea osoasă alveolară generalizată și depunerea de calculi în regiunea peri-implant (#42, #43, #44), iar zona anterioară și zona premolară a mandibulei drepte au arătat pierderi osoase peri-implantare. Rezultatele de laborator au fost în limite normale. Alte câteva situații de creștere a nivelului de proteine oncogene, inclusiv consumul de tutun și/sau alcool, fără deficiențe nutriționale, fără constatări de expunere la radiații ionizante, fără imunodeficiență sau imunosupresor și alte iritații provocate de îndepărtarea protezelor, au fost excluse. O leziune albicioasă a fost excizată, iar specimenul a fost trimis unui patolog oral. Suprafața implantului contaminat a fost tratată cu un laser. Diagnosticul patologic a fost confirmat ca fiind candidoză orală. Pacientul a fost supus unui tratament cu laser de trei ori pentru a trata leziunea peri-implantită. Un an mai târziu, implanturile din zona #42, #43 și #44 au fost îndepărtate din cauza peri-implantitei la clinica locală. Din scrisoarea de trimitere a clinicii locale, sistemul de implant a fost de tip conexiune prin fricțiune internă având o suprafață SLA, care a fost instalat timp de mai mult de 10 ani. La aproximativ 3 ani după operația cu laser, o masă proeminentă a fost identificată pe partea linguală a zonei #43 și #44. A fost efectuată o biopsie incizională și a fost diagnosticată ca SCC. Au fost efectuate investigații suplimentare, inclusiv analize de laborator, radiografie toracică, ECG, IRM, CT cu contrast, PET-CT și sonografie a gâtului. Pacientul a fost diagnosticat cu cT4aN2cM0, stadiul IVA, în conformitate cu sistemul de stadializare TNM propus de American Joint Committee on Cancer (AJCC, 2018). A fost programat imediat pentru o operație care a inclus disecția selectivă a gâtului, rezecția masei cu mandibulectomie marginală și reconstrucție cu un lambou radial al antebrațului. Raportul patologic final a fost un carcinom cu celule scuamoase bine diferențiat, cu o dimensiune a tumorii de 1,5 × 2,0 cm, fără metastaze la niciunul dintre cei 27 de ganglioni limfatici regionali și cu o margine de rezecție chirurgicală clară. Nu au fost observate invazii vasculare și perineurale; astfel, pacientul a fost diagnosticat cu pT1N0M0, stadiul I. Mai degrabă decât la interfața dintre implant și os, celulele tumorale au apărut mai întâi pe suprafața țesutului moale mucos și au pătruns adânc de-a lungul firelor implantului. Nici radioterapia adjuvantă, nici chimioterapia nu au fost administrate pacientului. A fost găsit un nod limfatic metastatic la nivelul ipsilateral drept IV pe o scanare CT îmbunătățită, luată la 4 luni postoperator. A fost efectuată o disecție selectivă a gâtului, inclusiv la nivelul drept IV, și a fost găsit un nou suspect de leziune malignă pe maxila dreaptă. Leziunea maxilară a pacientului a fost confirmată pentru SCC prin biopsie incizională; prin urmare, a fost supus unei intervenții chirurgicale suplimentare la 13 zile după a doua disecție selectivă a gâtului. S-a recoltat sângele pacientului înainte de operație, la 10 zile după operație și la 3 luni după operație. După o precipitare la temperatura camerei, probele au fost centrifugate la 4000 rpm timp de 20 de minute. S-au colectat doar supernatanții și s-au amestecat cu tampon de liză și s-au folosit pentru IP-HPLC. Am aplicat 100 μg din fiecare extract de proteină la procedura de imunoprecipitare folosind o coloană de agaroză cu protein A/G (Amicogen Co., Coreea). Coloanele de agaroză cu protein A/G au fost pre-incubate separat cu 1 μg din fiecare dintre cele 20 de antiseruri diferite, inclusiv p53, muc1, muc4, TGF-β1, survivin, Wnt1, E-cadherin, β-catenin, matricea metaloproteinazei (MMP)-3, MMP-10, TNFα, HER1, HER2, PAI-1, NRAS, KRAS, CEA, Met, FASL și ERb. Pe scurt, probele de proteină au fost amestecate cu 5 ml tampon de legare (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM vanadatul de sodiu, 0.2 mM PMSF și 0.5% NP-40) și incubate în coloanele de agaroză cu protein A/G la 10°C timp de 1 oră. Coloanele au fost așezate pe un agitator rotativ în timpul incubării. După spălarea fiecărei coloane cu o cantitate suficientă de soluție PBS (pH 7.3, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 43 mM Na2HPO4-7H2O și 1.4 mM KH2PO4), proteina țintă a fost eluată cu 150 μl tampon de eluție IgG (Pierce Co., SUA). Proteinele imunoprecipitate au fost analizate prin HPLC (1100 series®, Agilent, SUA) folosind o coloană cu fază inversă și un sistem detector microanalitic (SG Hightech Co., Coreea), operat cu o soluție de 0.15 M NaCl și 20% acetonitril la 0.4 ml/min timp de 30 de minute și analizat prin spectroscopie UV la 280 nm. În rezultatele IP-HPLC, valorile vârfului de proteină ale probei obținute din analiza HPLC în controlul negativ au fost folosite pentru a elimina valoarea vârfului de anticorp (mAU*s) [–]. Pentru a compara proteinele serice preoperative și postoperative, valorile vârfului de proteină au fost normalizate proporțional cu valoarea alfa-tubulinei și au fost reprezentate grafic sub formă de bare. Au fost preparate extracte de proteine din țesuturi tumorale, 100 μg din fiecare extract de proteină pentru procedura de imunoprecipitare, utilizând o coloană de agaroză cu proteină A/G. Coloanele de agaroză cu proteină A/G au fost preincubate individual cu 1 μg din fiecare dintre cele 9 antiseruri diferite, inclusiv TNFα, NRAS, HER2, Met, E-cadherin, p53, survivin, TGF-β1 și NFκB. Pe scurt, probele de proteine au fost amestecate cu 5 ml de tampon de legare (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM vanadatul de sodiu, 0.2 mM PMSF și 0.5% NP-40) și au fost incubate în coloanele de agaroză cu proteină A/G la 10 °C timp de 1 h. Pentru a compara proteina din gingia normală și cea din țesutul SCC, valorile vârfului de proteină au fost normalizate proporțional cu valoarea α-tubulinei și au fost reprezentate sub formă de bare. Au fost colectate rezultatele de rutină ale laboratorului, inclusiv numărul total de celule sanguine (CBC) cu numărătoarea diferențiată, nivelurile de proteină C reactivă (CRP) și rata de sedimentare a eritrocitelor (ESR). O creștere modestă a nivelului de CRP plasmatic în intervalul observat la indivizi aparent sănătoși este un predictor puternic al evenimentelor vasculare viitoare []. Chen et al. [] au raportat că prezența unui nivel preoperator ridicat de CRP seric (> 5,0 mg/L) este un indicator prognostic independent al cancerului oral. Rezultatele testelor probelor de sânge au fost comparate de la prima vizită, preoperator, postoperator și la momentul recurenței. Analizele IP-HPLC au arătat că p53, E-cadherin, β-catenin, MMP-10, HER2, NRAS, Met și ERb au scăzut în ziua 10 postoperator. Alți markeri proteici legați de semnalizarea oncogenă au crescut în ziua 10 postoperator. Acest lucru sugerează că proteinele oncogene, cum ar fi p53, E-cadherin, β-catenin, MMP-10, HER2, NRAS, Met și ERb au fost eliberate din tumora primară; prin urmare, nivelurile serice ale acestor proteine oncogene au scăzut după intervenția chirurgicală ablativă a tumorii, numărul absolut de neutrofile (ANC), ESR și CRP au fost crescute imediat postoperator. CRP nu a fost efectuat preoperator, deci datele nu pot fi comparate cu alte momente; cu toate acestea, nivelurile CRP nu s-au schimbat semnificativ înainte și după a doua operație (nivelul corect IV disecție selectivă a gâtului, Fișier suplimentar: Figura S1). În special, numărul ESR a fost crescut în perioada preoperatorie, așa cum s-a stabilit când o leziune malignă a fost confirmată prin biopsie incizională și comparată cu o probă luată la prima vizită. Acest lucru indică faptul că unele reacții inflamatorii pot afecta potențialul de transformare malignă. Schimbările perioperative ale eritrocitelor, hemoglobinei, hematocritului au arătat că nivelurile au scăzut în timpul perioadei post-chirurgicale, dar au avut tendința de a se recupera în timp (Fișier suplimentar: Figura S2). Proporția neutrofilelor segmentate a crescut imediat după operație, care sunt celule caracteristice ale reacțiilor inflamatorii acute, deoarece s-au mutat la rana chirurgicală imediat după traumă în câteva minute. Curbele grafice ale nivelurilor de limfocite, monocite, eozinofile și bazofile au arătat tendințe opuse față de nivelurile neutrofilelor segmentate (Fișier suplimentar: Figura S3).