O femelă de 2,1 kg, sterilizată, de 10 ani, câine Yorkshire Terrier, a fost prezentată la un spital local cu dispnee. Prezența lichidului pericardic a fost confirmată cu ajutorul ultrasunetelor, care a fost apoi colectat sub îndrumare cu ultrasunete, iar proprietățile fizice și chimice ale lichidului pericardic au fost examinate pentru a determina caracteristicile sale. Testele de cultură bacteriană și fungică au dat rezultate negative, indicând absența creșterii. Nu au existat anomalii în hemograma completă și în chimia serului. Pacientul a fost trimis la Spitalul Universitar de Medicină Veterinară din Kangwon. Au fost colectați în total 30 ml de lichid pericardic din zona unde a fost observat sub îndrumare ecografică cu anestezie locală; a fost administrat intravenos 1 mg/kg (0,2 ml) de alfaxalon, urmat de încă 0,1 ml. După 10-15 minute, au fost administrați 4 ml de lidocaină 2% diluată în soluție salină (1:1). S-a aplicat un frotiu pe efuzia pericardică sângeroasă și s-a efectuat un examen citologic. În cadrul examinării citologice, s-au observat binucleare, anizocitoză, anisocarioză, nucleoli anormali (mari, unghiulari și multipli), citoplasmă abundentă bazofilă, raport nuclear-citoplasmatic ridicat (N:C) și cromatină grosieră, precum și celule multinucleate atipice mari, indicând o malignitate de grad înalt. Aceste celule pot fi găsite fie ca indivizi, fie ca aglomerări de agregate cu un număr de eritrocite. Numeroși neutrofile și macrofage nedegenerative au fost observate alături de aceste celule. S-a observat eritrofagie, indicând hemoragie cronică. Distinguerea între celulele mezoteliale reactive și mezoteliomul din lichidul pericardic este dificilă, mai ales în prezența inflamației bogate în neutrofile. Prin urmare, autorul a încercat să descopere dacă celulele observate erau celule mezoteliale reactive, mezoteliom sau celule de adenocarcinom prin imunocitochimie, folosind cinci markeri (cytokeratin, vimentin, desmin, E-cadherin, și calretinin) [, –] Imunocitochimia a fost efectuată prin modificarea metodei recomandate de producătorii de anticorpi; celulele de mezoteliom ca control pozitiv pentru fiecare dintre anticorpii primari au fost preparate din celule de frotiu stocate, care au fost colectate de la un câine pacient diagnosticat cu mezoteliom post-mortem. La acel moment, celulele de mezoteliom au fost fixate în metanol timp de 10 minute și stocate într-un borcan de sticlă care conținea 1x soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) la 4℃ timp de câteva luni. Pentru colorarea calretinei și E-cadherinei, frotiurile de celule din efuziunile pericardice au fost fixate în metanol la -20 °C timp de 10 minute și spălate de trei ori cu PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, SUA) timp de 2 minute. Anticorpul primar împotriva calretinei (1:1000, Sigma C7479; gazdă: iepure; reactivitate: om, șoarece, câine) și E-cadherinei, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; gazdă: șobolan; reactivitate verificată: om, șoarece; reactivitate raportată: macac, câine, porc), au fost diluate cu 1% ser de bovine (BSA) / PBS (Komabiotech, Seul, Coreea de Sud). După o noapte de incubare cu anticorpii primari la 4 °C, frotiurile au fost spălate de trei ori în PBS timp de 2 minute. Anticorpul secundar Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) anticorpi de capră anti-rabinic imunoglobulină G (IgG; lanț greu + ușor) a fost diluat cu 1% BSA/PBS. După o noapte de incubare cu anticorpii secundari la 4 °C, frotiurile au fost spălate de trei ori în PBS timp de 2 minute. Frotiurile au fost apoi colorate cu un mediu de montare care conținea DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, SUA) și examinate cu ajutorul unui microscop confocal cu scanare laser LSM 780 (Carl Zeiss, Jena, Germania). Pentru colorarea citokeratinei și vimentinei, s-au folosit anticorpul monoclonal pan-citokeratină (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, SUA), anticorpul monoclonal vimentină (V9) și fluoresceina (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); același protocol (metodă de colorare sau timp necesar) ca cel descris mai sus a fost folosit cu un anticorp secundar diferit. Pentru colorarea desminului, s-a folosit anticorpul monoclonal desmin (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) ca anticorp primar și anticorpul de capră anti-IgG de șoarece (H + L) Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) ca anticorp secundar. S-au folosit aceleași proceduri ca cele descrise mai sus. Immunocitochimia lichidului pericardic a fost pozitivă pentru vimentină și citokeratină. DAPI și imaginea fuzionată a Fig. A-C sunt prezentate în Fig. D. A fost, de asemenea, pozitivă pentru desmină. DAPI și imaginea fuzionată a Fig. E, F sunt prezentate în Fig. G, H. În cele din urmă, a fost pozitivă pentru calretină și E-cadherină. DAPI și imaginea fuzionată a Fig. A-C sunt prezentate în Fig. D. Prin urmare, a fost diagnosticat mezoteliom malign [,, –].