Um paciente do sexo masculino de 73 anos de idade foi encaminhado pelo seu dentista geral para uma avaliação adicional de uma lesão esbranquiçada na gengiva aderida e peri-implantite associada. Uma vista panorâmica mostra perda de osso alveolar generalizada e deposição de cálculos na região peri-implante (#42, #43, #44), e a área anterior e pré-molar da mandíbula direita mostrou perda de osso crestal peri-implante. Os resultados laboratoriais estavam dentro dos limites normais. Outras situações de elevação de proteínas oncogénicas, incluindo o uso de tabaco e/ou álcool, sem deficiências nutricionais, sem descobertas de exposição a radiação ionizante, sem imunodeficiência ou imunossupressor, e outras irritações de próteses removíveis, foram todas excluídas. Uma lesão esbranquiçada foi excisada, e a amostra foi enviada a um patologista oral. A superfície do implante contaminado foi tratada com um laser. O diagnóstico patológico foi confirmado como candidíase oral. O paciente foi submetido a tratamento com laser três vezes para tratar a lesão peri-implantite. Um ano depois, o implante das áreas #42, #43, e #44 foi removido devido a peri-implantite na clínica local. A partir da carta de encaminhamento da clínica local, o sistema de implante era do tipo de conexão de fricção interna tendo uma superfície SLA, que foi instalado por mais de 10 anos. Cerca de 3 anos depois da operação a laser, foi identificada uma massa protuberante no lado lingual das áreas #43 e #44. Foi realizada uma biópsia incisional e foi diagnosticado um SCC. Foi realizado um trabalho adicional incluindo laboratório, raio-X do tórax, ECG, MRI, contraste CT, PET-CT, e sonografia do pescoço. O paciente foi diagnosticado com cT4aN2cM0 estágio IVA de acordo com o sistema de estadiamento TNM proposto pelo American Joint Committee on Cancer (AJCC, 2018). Ele foi imediatamente agendado para uma operação que incluiu dissecção seletiva do pescoço, ressecção da massa com mandibulectomia marginal, e reconstrução com um retalho livre do antebraço radial. O relatório patológico final foi de carcinoma de células escamosas bem diferenciado, com um tumor de 1,5 × 2,0 cm, sem metástases para qualquer um dos 27 gânglios linfáticos regionais, e margem de ressecção cirúrgica clara. Não foram observadas invasões vasculares e perineurais; assim, ele foi diagnosticado como pT1N0M0, estágio I. Especialmente, ao invés da interface entre o implante e o osso, as células tumorais ocorreram na superfície do tecido mole da mucosa primeiro e penetraram profundamente ao longo dos fios do implante. Não foi administrada radioterapia adjuvante nem quimioterapia ao paciente. Um linfonodo metastático foi encontrado no nível ipsilateral direito IV em uma tomografia computadorizada avançada feita 4 meses após a operação. A dissecção seletiva do pescoço, incluindo o nível direito IV, foi realizada, e uma nova lesão suspeita de maligna foi encontrada no maxilar direito. A lesão do maxilar do paciente foi confirmada como SCC por biópsia incisional; portanto, ele passou por uma cirurgia adicional 13 dias após a segunda dissecção seletiva do pescoço. O sangue do paciente foi coletado antes da operação, 10 dias após a operação e 3 meses após a operação. Após a precipitação à temperatura ambiente, as amostras foram centrifugadas a 4000 rpm durante 20 minutos. Apenas os sobrenadantes foram coletados e misturados com tampão de lise e usados para IP-HPLC. Aplicamos 100 μg de cada extrato de proteína ao procedimento de imunoprecipitação utilizando uma coluna de agarose de proteína A/G (Amicogen Co., Coreia). As colunas de agarose de proteína A/G foram pré-incubadas separadamente com 1 μg de cada um dos 20 antissoros diferentes, incluindo p53, muc1, muc4, TGF-β1, survivin, Wnt1, E-cadherin, β-catenina, metaloproteinase de matriz (MMP)-3, MMP-10, TNFα, HER1, HER2, PAI-1, NRAS, KRAS, CEA, Met, FASL e ERb. Em resumo, as amostras de proteínas foram misturadas com 5 ml de tampão de ligação (150 mM de NaCl, 10 mM de Tris pH 7.4, 1 mM de EDTA, 1 mM de EGTA, 0.2 mM de vanadato de sódio, 0.2 mM de PMSF e 0.5% de NP-40) e incubadas nas colunas de agarose de proteína A/G a 10°C durante 1 hora. As colunas foram colocadas num agitador rotativo durante a incubação. Após a lavagem de cada coluna com uma quantidade suficiente de solução de PBS (pH 7.3, 137 mM de NaCl, 2.7 mM de KCl, 43 mM de Na2HPO4-7H2O e 1.4 mM de KH2PO4), a proteína alvo foi eluída com 150 μl de tampão de lise de IgG (Pierce Co., EUA). As proteínas imunoprecipitadas foram analisadas por HPLC (1100 series® Agilent, EUA) utilizando uma coluna de fase reversa e um sistema de detector microanalítico (SG Hightech Co., Coreia), operado com uma solução de 0.15 M de NaCl e 20% de acetonitrilo durante 30 minutos e analisado por espectroscopia UV a 280 nm. Nos resultados de IP-HPLC, as áreas de pico de proteína obtidas a partir da análise de HPLC no controlo negativo foram usadas para eliminar a área de pico de anticorpo (mAU*s) [–]. Para comparar a proteína sérica pré-operativa e pós-operativa, as áreas de pico de proteína foram proporcionalmente normalizadas pelo valor de a-tubulina e representadas como uma barra. Extractos de proteínas foram preparados a partir de tecido tumoral, 100 μg de cada extrato de proteína para o procedimento de imunoprecipitação utilizando uma coluna de proteína A/G agarose. As colunas de proteína A/G agarose foram pré-incubadas individualmente com 1 μg de cada um dos 9 diferentes antissera, incluindo TNFα, NRAS, HER2, Met, E-cadherina, p53, survivina, TGF-β1, e NFκB. Em resumo, as amostras de proteínas foram misturadas com 5 ml de tampão de ligação (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM vanadato de sódio, 0.2 mM PMSF, e 0.5% NP-40) e incubadas nas colunas de proteína A/G agarose a 10 °C durante 1 h. Para comparar a proteína normal da gengiva e do tecido SCC, os valores de área do pico de proteína foram normalizados proporcionalmente pelo valor de a-tubulina e plotados como uma barra. Os resultados laboratoriais de rotina foram coletados, incluindo contagens de células sanguíneas completas (CBC) com contagens diferenciais, níveis de proteína C-reativa (CRP) e taxa de sedimentação de eritrócitos (ESR). Uma modesta elevação no plasma CRP na faixa observada em indivíduos aparentemente saudáveis é um forte indicador de futuros eventos vasculares []. Chen et al. [] relataram a presença de níveis elevados de CRP sérico pré-operatório (> 5,0 mg/L) é um indicador prognóstico independente de câncer oral. Os resultados dos testes de amostras de sangue foram comparados da primeira visita, pré-operativamente, pós-operativamente, e no momento da recorrência. As análises por IP-HPLC revelaram que p53, E-cadherina, β-catenina, MMP-10, HER2, NRAS, Met e ERb diminuíram no dia 10 pós-operatório. Outros marcadores de proteínas relacionados com a sinalização oncogénica aumentaram no dia 10 pós-operatório. Isto sugere que proteínas oncogénicas, tais como p53, E-cadherina, β-catenina, MMP-10, HER2, NRAS, Met e ERb foram libertadas do tumor primário; por conseguinte, os níveis séricos destas proteínas oncogénicas diminuíram após a cirurgia de ablação do tumor, contagem absoluta de neutrófilos (ANC), ESR e CRP, foram elevados imediatamente após a operação. O CRP não foi realizado antes da operação, e, portanto, esses dados não podem ser comparados com outros pontos de tempo; no entanto, os níveis de CRP não mudaram significativamente antes e depois da segunda operação (dissecção seletiva do pescoço direito nível IV, Arquivo adicional: Figura S1). Notavelmente, as contagens de ESR foram elevadas no período pré-operativo, conforme determinado quando uma lesão maligna foi confirmada por biópsia incisional e comparada com uma amostra tomada na primeira visita. Isso indica que algumas reações inflamatórias podem afetar o potencial de transformação maligna. As alterações perioperatórias nas hemácias, hemoglobina e hematócrito mostraram que os níveis diminuíram durante o pós-operatório, mas tendiam a se recuperar ao longo do tempo (Ficheiro adicional: Figura S2). A proporção de neutrófilos segmentados aumentou imediatamente após a cirurgia, que são células características de reações inflamatórias agudas, porque se moveram para a ferida cirúrgica imediatamente após o trauma em vários minutos. As curvas grafadas dos níveis de linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos mostraram tendências opostas dos níveis de neutrófilos segmentados (Ficheiro adicional: Figura S3).