Uma fêmea de 10 anos de idade, Yorkshire Terrier, castrada, de 2,1 kg, apresentou-se num hospital local com dispneia. A presença de fluido pericárdico foi confirmada por ultrassom, que foi então coletado sob orientação por ultrassom, e as propriedades físicas e químicas do fluido pericárdico foram examinadas para determinar as suas características. Os testes de cultura bacteriológica e fúngica produziram resultados negativos, indicando que não havia crescimento. Não houve anormalidades no hemograma completo e na química do soro. O paciente foi encaminhado para o Hospital de Ensino Veterinário da Universidade Nacional de Kangwon. Um total de 30 ml de fluido pericárdico foi coletado da área onde foi observado sob orientação por ultrassom com anestesia local; 1 mg/kg (0,2 ml) de alfaxalona foi administrado intravenosamente, seguido por um adicional de 0,1 ml. Após 10-15 minutos, 4 ml de lidocaína a 2% diluída em solução salina (1:1) foi administrada. O derrame pericárdico sangrento foi espalhado e um exame citológico foi realizado. Em exame citológico, binucleação, anisocitose, anisocariose, nucleólios anormais (grandes, angulares e múltiplos), abundante citoplasma basófilo, alta relação nuclear-citoplasmática (N:C), e cromatina grosseira, e grandes células multinucleadas atípicas, indicando malignidade de alto grau foram observados. Estas células podem ser encontradas como individuais ou como grupos agregados com um número de eritrócitos. Numerosos neutrófilos e macrófagos não degenerativos foram observados ao lado destas células. Eritrofagia foi observada, indicando hemorragia crônica. É difícil distinguir entre células mesoteliais reativas e mesotelioma no fluido pericárdico, especialmente na presença de inflamação rica em neutrófilos. Portanto, o autor procurou descobrir se as células observadas eram células mesoteliais reativas, mesotelioma ou adenocarcinoma através de imunocitoquímica utilizando cinco marcadores (citoceratina, vimentina, desmina, E-caderina e calretinina) [, --] A imunocitoquímica foi realizada modificando o método recomendado pelos fabricantes de anticorpos; células de mesotelioma como controlo positivo para cada um dos anticorpos primários foram preparadas a partir de células de esfregaço armazenadas, que foram recolhidas de um cão com diagnóstico de mesotelioma após a morte. Nessa altura, as células de mesotelioma foram esfregues e fixadas em metanol durante 10 minutos e armazenadas num frasco de vidro contendo 1x solução salina tamponada com fosfato (PBS) a 4℃ durante vários meses. Para a coloração de calretinina e E-cadherina, esfregaços de células de efusões pericárdicas foram fixados em metanol a -20 °C durante 10 minutos e lavados três vezes com PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, EUA) durante 2 minutos. Os anticorpos primários contra calretinina (1:1000, Sigma C7479; hospedeiro: coelho; reatividade: humana, rato, cão) e anti-E-cadherina, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; hospedeiro: rato; reatividade verificada: cinomolgo, cão, porco), foram diluídos com 1% de soro de bovino (BSA)/PBS (Komabiotech, Seul, Coreia do Sul). Após incubação durante a noite com os anticorpos primários a 4 °C, os esfregaços foram lavados três vezes em PBS durante 2 minutos. O anticorpo secundário Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) anticorpo de cabra anti-rabbit imunoglobulina G (IgG; cadeia pesada + leve [H + L]) foi diluído com 1% de BSA/PBS. Após incubação durante a noite com os anticorpos secundários a 4 °C, os esfregaços foram lavados três vezes em PBS durante 2 minutos. Os esfregaços foram então contra-corados com meio de montagem contendo DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA) e examinados utilizando um microscópio de varrimento por laser LSM 780 (Carl Zeiss, Jena, Alemanha). Para a coloração de citoqueratina e vimentina, foram usados o anticorpo monoclonal pan citoqueratina (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, EUA), anticorpo monoclonal vimentina (V9), e fluoresceína (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); o mesmo protocolo (método de coloração ou tempo requerido) como descrito acima foi realizado usando um anticorpo secundário diferente. Para a coloração de desmina, foi utilizado anticorpo monoclonal de desmina (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) como anticorpo primário e anticorpo de cabra anti-IgG de rato (H + L) Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) como anticorpo secundário. Os mesmos procedimentos descritos acima foram realizados. A imunocitoquímica do fluido pericárdico foi positiva para vimentina e citoqueratina. DAPI e a imagem combinada de Fig. A-C são apresentadas em Fig. D. Também foi positiva para desmina. DAPI e a imagem combinada de Fig. E, F são mostradas em Fig. G, H. Finalmente, foi positiva para calretinina e E-caderina. DAPI e a imagem combinada de Fig. A-C são mostradas em Fig. D. Portanto, foi diagnosticado mesotelioma maligno [,, –].