Een 73-jarige mannelijke patiënt werd doorverwezen door zijn algemene tandarts voor verdere evaluatie van een witachtige laesie op de gekoppelde gingiva en de daarmee gepaard gaande peri-implantitis. Een panoramisch beeld toont een gegeneraliseerd verlies van alveolair bot en de afzetting van stenen in de peri-implantaire regio (#42, #43, #44), en het gebied van de rechtermaagmond en de premolaar toonde een peri-implantair verlies van bot. De laboratoriumresultaten waren binnen de normale grenzen. Andere gevallen van verhoogde niveaus van verschillende oncogene eiwitten, waaronder tabak- en/of alcoholgebruik, geen voedingstekorten, geen gevallen van blootstelling aan ioniserende straling, geen immunodeficiëntie of immunosuppressie en andere irritaties door verwijderde protheses werden allemaal uitgesloten. Een witachtige laesie werd verwijderd en het specimen werd naar een orale patholoog gestuurd. Het besmette implantaatoppervlak werd behandeld met een laser. De pathologische diagnose werd bevestigd als orale candidiasis. De patiënt onderging drie keer een laserbehandeling om de peri-implantitis laesie te behandelen. Een jaar later werden zijn implantaten in de gebieden #42, #43 en #44 verwijderd vanwege peri-implantitis op de plaatselijke kliniek. Volgens de verwijzingsbrief van de plaatselijke kliniek was het implantaatsysteem een intern frictiesysteem met een SLA-oppervlak, dat al meer dan 10 jaar werd gebruikt. Ongeveer 3 jaar na de laseroperatie werd een uitstulping ontdekt aan de linguale kant van de #43 en #44 zone. Een incisionale biopsie werd uitgevoerd en de diagnose was SCC. Verdere onderzoeken werden uitgevoerd waaronder lab, thorax-röntgen, ECG, MRI, contrast-CT, PET-CT en nek-sonografie. De patiënt werd gediagnosticeerd met cT4aN2cM0 stadium IVA volgens het TNM-stadiëringssysteem voorgesteld door het American Joint Comité on Cancer (AJCC, 2018). Hij werd onmiddellijk ingepland voor een operatie die selectieve nekdissectie, massaresectie met marginale mandibulectomie en reconstructie met een radiale onderarm-vrije flap omvatte. Het uiteindelijke pathologische verslag was goed gedifferentieerd plaveiselcelcarcinoom, met een 1,5 × 2,0 cm grootte van de tumor, geen metastase naar een van de 27 regionale lymfeklieren en een duidelijke chirurgische resectiemarge. Vasculaire en perineurale invasies werden niet waargenomen; dus werd hij gediagnosticeerd als pT1N0M0, stadium I. Specifiek, in plaats van op het grensvlak tussen het implantaat en het bot, kwamen tumorcellen eerst op het oppervlak van het mucosale zachte weefsel voor en penetreerden diep langs de implantaatdraden. Aan de patiënt werd geen adjuvante radiotherapie of chemotherapie toegediend. Een metastatische lymfeknoop werd gevonden op het juiste ipsilaterale niveau IV op een verbeterde CT die 4 maanden na de operatie werd genomen. Selectieve nekdissectie, inclusief het juiste niveau IV, werd uitgevoerd en een nieuw ontwikkeld verdacht voor kwaadaardige laesie werd gevonden op de rechter kaak. De kaaklaesie van de patiënt werd bevestigd voor SCC door incisionale biopsie; daarom onderging hij een bijkomende operatie 13 dagen na de tweede selectieve nekdissectie. Het bloed van de patiënt werd preoperatief, 10 dagen postoperatief en 3 maanden postoperatief verzameld. Na neerslagvorming bij kamertemperatuur werden de monsters gecentrifugeerd bij 4000 rpm gedurende 20 minuten. Alleen de supernatanten werden verzameld en gemengd met lysisbuffer en gebruikt voor IP-HPLC. We hebben 100 μg van elk eiwitextract toegepast op de immunoprecipitatieprocedure met behulp van een eiwit A/G agarosecollectie (Amicogen Co., Korea). De eiwit A/G agarosecollecties werden afzonderlijk voorgeïncubeerd met 1 μg van elk van de 20 verschillende antistoffen, waaronder p53, muc1, muc4, TGF-β1, survivin, Wnt1, E-cadherin, β-catenine, matrix metalloproteinase (MMP)-3, MMP-10, TNFα, HER1, HER2, PAI-1, NRAS, KRAS, CEA, Met, FASL en ERb. Kort gezegd werden de eiwitmonsters gemengd met 5 ml bindingsbuffer (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM natriumvanadaat, 0.2 mM PMSF en 0.5% NP-40) en gedurende 1 uur geïncubeerd in de eiwit A/G agarosecollecties bij 10 °C. De kolommen werden op een roterende mixer geplaatst tijdens de incubatie. Na het wassen van elke kolom met een voldoende hoeveelheid PBS-oplossing (pH 7.3, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 43 mM Na2HPO4-7H2O en 1.4 mM KH2PO4), werd het doelwit eiwit geëlueerd met 150 μl IgG-elutiesuspensie (Pierce Co., USA). De geïmmunoprecipiteerde eiwitten werden geanalyseerd met behulp van HPLC (1100 series®, Agilent, USA) met behulp van een reverse-phase kolom en micro-analytisch detector systeem (SG Hightech Co., Korea), die werd gebruikt met een 0.15 M NaCl en 20% acetonitril oplossing bij 0.4 ml/min gedurende 30 min, en geanalyseerd via UV spectroscopie bij 280 nm. In de IP-HPLC resultaten werden de monster eiwit piek gebieden verkregen uit de HPLC analyse in de negatieve controle gebruikt om de piek gebied van het antilichaam (mAU*s) te elimineren [–]. Om preoperatief en postoperatief serum eiwit te vergelijken werden de piek gebied waarden van eiwitten proportioneel genormaliseerd met behulp van de α-tubuline waarde en uitgezet als een balk. Eiwitextracten werden bereid uit tumorextract, 100 μg per eiwitextract voor de immunoprecipitatieprocedure met behulp van een eiwit A/G agarosecolonne. De eiwit A/G agarosecolonne werd individueel voorgeïncubeerd met 1 μg van elk van de 9 verschillende antiserum, waaronder TNFα, NRAS, HER2, Met, E-cadherin, p53, survivin, TGF-β1 en NFκB. Kort gezegd werden de eiwitmonsters gemengd met 5 ml bindingsbuffer (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM natriumvanadaat, 0.2 mM PMSF en 0.5% NP-40) en geïncubeerd in de eiwit A/G agarosecolonne bij 10 °C gedurende 1 uur. Om de eiwitwaarde van normaal gingiva en SCC weefsel te vergelijken werden de piekwaarde van de eiwitten proportioneel genormaliseerd met de waarde van α-tubuline en uitgezet als een balk. Routine laboratoriumresultaten werden verzameld, inclusief complete bloedceltellingen (CBC) met differentiële telling, C-reactief proteïne (CRP) niveaus, en erythrocyte sedimentation rate (ESR). Een bescheiden verhoging van de plasma CRP in het bereik dat wordt waargenomen bij ogenschijnlijk gezonde individuen is een sterke voorspeller van toekomstige vasculaire gebeurtenissen []. Chen et al. [] rapporteerden de aanwezigheid van verhoogde preoperatieve serum CRP niveau (> 5.0 mg/L) als een onafhankelijke prognostische indicator van orale kanker. De resultaten van de bloedmonster tests werden vergeleken vanaf het eerste bezoek, preoperatief, postoperatief, en op het moment van herhaling. De IP-HPLC analyses onthulden dat p53, E-cadherin, β-catenin, MMP-10, HER2, NRAS, Met, en ERb waren afgenomen op postoperatieve dag 10. Andere eiwitmarkers gerelateerd aan oncogene signalering waren verhoogd op postoperatieve dag 10. Dit suggereert dat oncogene eiwitten, zoals p53, E-cadherin, β-catenin, MMP-10, HER2, NRAS, Met, en ERb werden vrijgelaten uit de primaire tumor; daarom waren de serumniveaus van deze oncogene eiwitten afgenomen na tumor-ablatieve chirurgie, het absolute neutrofiel aantal (ANC), de ESR en de CRP waren onmiddellijk na de operatie verhoogd. De CRP werd niet voor de operatie bepaald en dus kunnen die gegevens niet worden vergeleken met andere tijdstippen; de CRP-niveaus waren echter niet significant veranderd voor en na de tweede operatie (rechtse niveau IV selectieve nekdissectie, Bijkomende bestand: Figuur S1). Het aantal ESR was verhoogd in de preoperatieve periode, zoals bepaald toen een kwaadaardige laesie werd bevestigd door incisionale biopsie en vergeleken met een monster genomen bij het eerste bezoek. Dat geeft aan dat sommige ontstekingsreacties het potentieel van kwaadaardige transformatie kunnen beïnvloeden. Perioperatieve veranderingen in de RBC's, hemoglobine, hematocrit toonden aan dat de niveaus afnamen tijdens de postoperatie, maar neigden om te herstellen na verloop van tijd (Additionele bestand: Figuur S2). Het aandeel van gesegmenteerde neutrofielen nam onmiddellijk na de operatie toe, wat kenmerkende cellen zijn van acute inflammatoire reacties, omdat ze onmiddellijk na het trauma binnen enkele minuten naar de chirurgische wond gingen. De grafieken van lymfocyt-, monocyten-, eosinofiel- en basofilenniveaus vertoonden tegenovergestelde trends van de gesegmenteerde neutrofielenniveaus (Additioneel bestand: Figuur S3).