Een 2,1 kg, gesteriliseerde, 10-jarige Yorkshire Terrier werd met dyspnoe naar een lokaal ziekenhuis gebracht. De aanwezigheid van pericardiale vloeistof werd bevestigd op echografie, die vervolgens werd verzameld onder echografische begeleiding, en de fysische en chemische eigenschappen van de pericardiale vloeistof werden onderzocht om de kenmerken ervan te bepalen. De bacteriële en schimmelcultuurtests leverden negatieve resultaten op, wat wijst op geen groei. Er waren geen abnormaliteiten in het volledige bloedbeeld en de serumchemie. De patiënt werd verwezen naar het Kangwon National University Veterinary Teaching Hospital. In totaal werd 30 ml pericardvocht verzameld uit het gebied waar het werd waargenomen onder echografische begeleiding met lokale anesthesie; 1 mg/kg (0.2 ml) alfaxalone werd intraveneus toegediend, gevolgd door een extra 0.1 ml. Na 10-15 minuten werd 4 ml 2% lidocaïne verdund in zoutoplossing (1:1) toegediend. Bloederige pericardvocht werd uitgewreven en een cytologisch onderzoek werd uitgevoerd. Bij cytologisch onderzoek werden binucleatie, anisocytose, anisokaryose, abnormale nucleoli (grote, hoekige en meervoudige), overvloedig basofiel cytoplasma, hoge nucleair-cytoplasmatische verhouding (N:C) en grof chromatine en grote atypische meercellige cellen waargenomen die een hooggradige maligniteit aanduiden. Deze cellen kunnen als individuen of als aggregaten van een aantal erythrocyten worden gevonden. Naast deze cellen werden talrijke niet-degeneratieve neutrofielen en macrofagen waargenomen. Erythrofagie werd waargenomen, wat op chronisch bloedverlies duidt. Het is een uitdaging om reactieve mesotheelcellen en mesothelioomcellen in het pericardiale vocht te onderscheiden, vooral in aanwezigheid van een neutrofielrijke ontsteking. Daarom wilde de auteur via immunocytochemie met vijf markers (cytokeratine, vimentine, desmine, E-cadherine en calretinin) ontdekken of de waargenomen cellen reactieve mesotheel-, mesothelioom- of adenocarcinoomcellen waren [, –] Immunocytochemie werd uitgevoerd door de aanbevolen methode van de antilichaamfabrikanten te wijzigen; mesothelioomcellen als positieve controle voor elk van de primaire antilichamen werden bereid uit opgeslagen uitstrijkcellen, die werden verzameld van een hond die na zijn dood met mesothelioom werd gediagnosticeerd. Op dat moment werden de mesothelioomcellen uitstrijkjes en gedurende 10 minuten in methanol gefixeerd en gedurende enkele maanden bewaard in een glazen pot met 1x fosfaatbufferde zoutoplossing (PBS) bij 4 ℃. Voor calretinin- en E-cadherin-kleuring werden celsmeersels van pericardial effusies gefixeerd in methanol bij -20 °C gedurende 10 minuten en driemaal gewassen met PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA) gedurende 2 minuten. De primaire antilichamen tegen calretinin (1:1000, Sigma C7479; gastheer: konijn; reactiviteit: mens, muis, hond) en anti-E-cadherin, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; gastheer: rat; geverifieerde reactiviteit: cynomolgus, hond, varken), werden verdund met 1% runderserumalbumine (BSA)/PBS (Komabiotech, Seoul, Zuid-Korea). Na een nachtelijke incubatie met de primaire antilichamen bij 4 °C werden de platen driemaal gewassen in PBS gedurende 2 minuten. Het secundaire antilichaam Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) geit-anti-konijn immunoglobuline G (IgG; zware + lichte keten [H + L]) werd verdund met 1% runderserumalbumine (BSA)/PBS. Na een nachtelijke incubatie met de secundaire antilichamen bij 4 °C werden de platen driemaal gewassen in PBS gedurende 2 minuten. De platen werden vervolgens contrasteren met montagemiddelen die DAPI bevatten (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) en onderzocht met behulp van een LSM 780 laser-scanning confocale microscoop (Carl Zeiss, Jena, Duitsland). Voor cytokeratine- en vimentine-kleuring werden pan cytokeratine monoklonale antilichamen (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, USA), vimentine monoklonale antilichamen (V9) en fluoresceïne (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82) gebruikt; hetzelfde protocol (kleuringsmethode of vereiste tijd) als hierboven beschreven werd uitgevoerd met behulp van een ander secundair antilichaam. Voor desmine kleuring werd desmine monoklonale antilichaam (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) gebruikt als primair antilichaam en Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) geit anti-muis IgG (H + L) werd gebruikt als secundair antilichaam. Dezelfde procedures als hierboven beschreven werden uitgevoerd. Immunocytochemie van pericardiale vloeistof was positief voor vimentine en cytokeratine. DAPI en de samengevoegde afbeelding van Fig. A-C worden getoond in Fig. D. Het was ook positief voor desmine. DAPI en de samengevoegde afbeelding van Fig. E, F worden getoond in Fig. G, H. Tenslotte was het positief voor calretinin en E-cadherin. DAPI en de samengevoegde afbeelding van Fig. A-C worden getoond in Fig. D. Daarom werd maligne mesothelioom gediagnosticeerd [,, –].