En 11 år gammel, intakt hann-tysk schäferhund (GSD) ble henvist til beredskapsavdelingen ved Institutt for kliniske fag for kjæledyr av fakultetet for veterinærmedisin ved Utrecht University med en 2-dagers historie med akutt dyspné og generell svakhet. Vaccinering og deworming ble utført regelmessig. Hunden hadde besøkt Sør-Europa 6 måneder før presentasjonen. Ingen medisiner ble administrert før utviklingen av de kliniske tegnene og ingen miljømessige omstendigheter som kunne forårsake dyspné (f.eks. tobakk, eksponering for organisk løsemiddel, støv) ble rapportert. Den fysiske undersøkelsen viste en responsiv, men sløv hund med generell svakhet, alvorlig dyspné, cyanotiske slimhinner, forlenget kapillær refilltid, svake perifere pulser, takykardi (puls 180 slag/min) og et systolisk murmur av grad 1 av 6 med maksimal intensitet over den høyre hjertespissen. Sterke lungelyder ble hørt ved lungeauskultasjon. Fullt blodtall (CBC) viste en mild, moden leukocytose (hvite blodceller: 18,9 × 109/L; referanseintervall 4,5–14,6 × 109/L) og et hematokrit på 56 % (referanseintervall 42–61 %). Biokjemien viste ingen abnormiteter. Analyse av arterieblodgass viste alvorlig hypoksemi (PaO2: 48,5 mm Hg; referanseintervall 85–103 mm Hg) og mild hypokapni (PaCO2: 27,0 mm Hg; referanseintervall: 32–43 mm Hg). Den mistenkte årsaken til hypokapni var hyperventilasjon. D-dimer- og antitrombinkonsentrasjoner var innenfor referanseintervallene. Dirofilaria immitis antigen snap test (SNAP® Heartworm RT Test, IDEXX Laboratories) og fekal undersøkelse (flotasjon og Baermann larveisoleringsteknikk) var begge negative. Torakals radiografi viste en utvidelse av pulmonal arterie trunk og høyre side kardiomegali. Ekkokardiografi var svært komplisert på grunn av hundens sterke angst og pusting og ble derfor begrenset. Den viste alvorlig høyre ventrikulær utvidelse, mild jevn utvidelse av hovedpulmonal arterie, systolisk flatning av interventrikulær septum og moderat tricuspid regurgitation. Anvendelsen av den modifiserte Bernoulli-ligningen på hastigheten av tricuspid regurgitation-strålen viste et estimert systolisk pulmonal arterie trykk på 77 mm Hg, gradet som alvorlig PH (referanse < 25 mm, alvorlig > 75 mm Hg) []. Venstre ventrikulære dimensjoner ble markert redusert, i samsvar med venstre-sidig volumudtømming. En kontrast-ekkokardiografi ble utført, som var negativ, og utelukket dermed intra- og ekstra-kardiale høyre-til-venstre shunting. For å håndtere den alvorlige hypoksemi og PH ble hunden plassert i en oksygenbur med en inspirert konsentrasjon av oksygen mellom 40 og 50%. Videre ble 1,5 mg/kg/8 t oral sildenafil (Viagra®, Pfizer, New York, USA) og 0,25 mg/kg/12 t oral pimobendan (Vetmedin®, Boehringer Ingelheim, Tyskland) administrert. Denne terapien påvirket ikke signifikant hundens kliniske tilstand. Imidlertid ble arteriel hypoksemi mildt forbedret etter den første dagen av terapi (PaO2 økte fra 48,5 til 53 mm Hg, referanseintervall 85–103 mm Hg). Ekkokardiogrammet ble gjentatt på den tredje dagen av terapi og de ekkokardiografiske endringene og alvorlighetsgraden av PH ble markert redusert. Den høyre ventrikulære utvidelsen hadde dramatisk redusert, det interventrikulære septum var ikke lenger flatt, og trykkgradienten av tricuspid regurgitation ble redusert fra 77 mm Hg til 41 mm Hg (referanse < 25 mm Hg). Derfor ble terapi med pimobendan og sildenafil fortsatt under den innlagte perioden (7 dager). Som ytterligere diagnostiske trinn ble en (før- og etterkontrast) CT-skanning med apnø, etterfulgt av en kirurgisk lungebiopsi i samme anestesi-sesjon utført 4 dager etter den første presentasjonen. En enkeltskive helisk CT-skanner (Philips Secura, Philips NV, Eindhoven, Nederland) ble brukt. Tekniske innstillinger inkluderte 3 mm heliske skiver, 120 kV, 200 mA, 292 mm synsfelt, 512 × 512 matrise og en algoritme med høy romfrekvens. På CT-bilder viste lungeparenkym subtile sentrilobulære glass-nødder og en forstørret lungearterie. Septal linjer, pleural effusjon og lymfadenopati var fraværende. CT-funn var forenlig med PH uten en endelig diagnose. Etter CT-skanningen ble en lungebiopsi fra venstre kranial lunge lob (3 × 2 cm) tatt for histopatologisk undersøkelse med en mini-torakotomi. Rett etter denne prosedyren ble en terapi med deksametason (0,25 mg/kg q24 t I.V., Rapidexon ®, Eurovet Animal Health, Bladel, Nederland) initiert som en siste utvei mens histopatologiske resultater var avventende (3 dager). Histopatologi av kirurgisk lungebiopsi viste en moderat kronisk interstitiell histiocytisk lungebetennelse av ukjent etiologi og atelektase ved hematoxylin og eosin, periodisk syre-Schiff og Van Gieson-farging. Vaskulære endringer ble ikke klart identifisert i utgangspunktet. På grunn av den dårlige responsen på den igangsatte behandlingen og den mistenkte dårlige prognosen basert på de histopatologiske resultatene ble hunden avlivet. Obduksjon ble utført med eierens informerte samtykke. Gross patologi av lungene viste moderat kollapsede faste lunger med et diffust flekkete utseende med flere mørke røde foci på 1 × 1 × 3 mm, og små antall hvite foci på 1 × 1 × 1 mm, ofte omgitt av en mørk rød sone (demarkasjon) tilfeldig fordelt over alle lungelapper. Rutinemessig histopatologi av lungene viste multifokal vaskulær omforming. For å skille mellom små arterier og vener, som er essensielt for å diagnostisere PVOD, ble en ytterligere farging som visualiserer elastiske fibre og kollagen (Weigert's resorcin Fuchsin) lagt til for å identifisere elastiske lamina. Hos denne hunden, som hos mennesker med PVOD, ble alle tre avdelingene (arterier, vener og kapillærer) i den pulmonale mikrocirkulasjonen påvirket, selv om endringene i det pulmonale venesystemet var de mest uttalte. Venulære lesjoner inkluderte alvorlig konsentrisk intimal proliferasjon, delvis til fullstendig obliterasjon av lumen og post-trombotisk rekanalisering. Kapillærlesjoner ble organisert i foci, mest tydelig ved siden av omformede venuler og ble karakterisert ved proliferasjon av plumb endoteliale celler (lik PCH). Segmental overbelastning av alveolare kapillærer var også regelmessig assosiert med foci av PCH. Arteriel lesjoner lignet på de av PAH med konsentrisk intimal fortykkelse ved økt ekstracellulær matriks og medial hypertrofi, men komplekse plexiforme lesjoner var fraværende. Disse funnene var i samsvar med funnene beskrevet av Williams et al. [] og derfor den menneskelige ekvivalenten av PVOD. Genomet DNA fra saken ble isolert fra EDTA-blod ved hjelp av en semi-automatisert Chemagen-ekstraktionsrobot (PerkinElmer Chemagen Technologie GmbH) og ble lagret ved -20 °C. Omtrent 6 år senere ble det genomiske DNA fra saken og en ikke-relatert sunn GSD analysert ved hjelp av helgenom-sekvensering. Integriteten til DNA ble kontrollert på en Bioanalyzer (Agilent, Santa Clara, USA) og kvantifisert ved hjelp av Qubit dsDNA HS (Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA). DNA-biblioteker ble laget ved hjelp av TruSeq Nano library prep kit (TruSeq Nano library prep kit, Illumina, San Diego CA, USA) ved hjelp av 200 ng gDNA-inngang. Helgenom-sekvenseringsinformasjon ved 30× dekning ble oppnådd ved hjelp av et HiSeqX Ten-instrument (HiSeqX Ten instrument, Illumina, San Diego CA, USA) og 2 × 150 basepar par-ende-leser. Data ble behandlet med vår internt utviklede pipeline v1.2.1 () inkludert analyse av somatiske mutasjoner (Strelka, VarScan, FreeBayes og MuTect) og et genomanalyseverktøy (GATK v. 3.2.2) [] i henhold til retningslinjene for beste praksis [] Sekvensavlesninger ble kartlagt mot Canine Reference Genome (CanFam 3.1) ved hjelp av Burrows-Wheeler-justering med maksimale eksakte treff (BWA-MEM) v0.7.5a [] etterfulgt av markerte duplikater, sammenslåing av baner og realignment av indels. Basiskalibreringen ble ikke utført. I humanmedisin har mutasjoner i BMPR2, ACVRL1, ENG, KCNK3, CAV-1 og SMAD9 blitt foreslått å være årsaksfaktorer for en autosomal dominant form av PAH [] Disse genene ble inkludert i analyser for å forhindre manglende kandidatmutasjoner på grunn av fænotypiske feilklassifiseringer. Når man sammenlignet tilfeller og kontroller, avslørte analysen av disse genene 196 unike intronvarianter. Når man sammenlignet sekvensen av EIF2AK4 i tilfellet og den friske GSD, ble det avdekket 124 unike varianter, hvorav 9 var lokalisert i 3'UTR, 112 var intronvarianter og 3 var eksonvarianter. Saken var homozygot mutant for c.2961T>C og c.1266G>A, en heterozygot variasjon ble funnet ved c.2092G>A. Variantvalidering ble utført ved hjelp av Sanger-sekvensering på amplifiserte polymerase-kjedereaksjons-produkter fra genomisk DNA ved hjelp av Platinum Taq Polymerase (Invitrogen). Etter eksonuklease I-behandling ble DNA-sekvensreaksjoner utført ved hjelp av BigDye v3.1, sekvensert på en ABI3130XL og analysert i Lasergene (versjon 12.0 DNASTAR). Fire av de fem andre GSD'er, som ikke var kjent for noen form for respiratorisk stress og var ≥ 10 år gamle, avslørte den samme genotype som saken og ble derfor utelukket som årsaksfaktorer for PVOD.