En 2,1 kg, spayed kvinnelig, 10 år gammel Yorkshire Terrier hund ble vist frem til et lokalt sykehus med dyspné. Tilstedeværelsen av perikardiell væske ble bekreftet på ultralyd, som deretter ble samlet under ultralydveiledning, og de fysiske og kjemiske egenskapene til perikardiell væske ble undersøkt for å bestemme dens egenskaper. Bakterielle og fungale dyrkningstester ga negative resultater, som indikerer ingen vekst. Det var ingen abnormiteter i fullstendig blodtelling og serumkjemi. Pasienten ble henvist til Kangwon National University Veterinary Teaching Hospital. Totalt 30 ml perikardvæske ble samlet fra området der det ble observert under ultralydveiledning med lokalbedøvelse; 1 mg/kg (0,2 ml) alfaxalon ble administrert intravenøst, etterfulgt av ytterligere 0,1 ml. Etter 10-15 minutter ble 4 ml 2% lidokain fortynnet i saltvann (1:1) administrert. Blodig perikardvæske ble smurt og cytologisk undersøkelse ble utført. Ved cytologisk undersøkelse ble det observert binucleation, anisocytosis, anisokaryosis, unormale nukleoli (store, kantete og flere), rikelig basofil cytoplasma, høyt nukleær-cytoplasmatisk forhold (N:C), og grovt kromatin, og store atypiske multinucleate celler, som indikerer malignitet av høy grad. Disse cellene kan bli funnet enten som individuelle eller som klumper av aggregater med et antall erytrocytter. Tallrike ikke-degenerative neutrofiler og makrofager ble observert sammen med disse cellene. Erythrophagia ble observert, som indikerer kronisk blødning. Det er utfordrende å skille mellom reaktive mesoteliale celler og mesoteliom i perikardialvæsken, særlig i nærvær av neutrofil-rik inflammasjon. Derfor hadde forfatteren som mål å finne ut om de observerte cellene var reaktive mesoteliale celler, mesoteliom eller adenokarsinomceller via immunokjemi ved hjelp av fem markører (cytokeratin, vimentin, desmin, E-cadherin og calretinin) [, –] Immunokjemi ble utført ved å modifisere metoden anbefalt av antistoffprodusentene; mesoteliomceller som positiv kontroll for hvert av de primære antistoffene ble forberedt fra lagrede smøreceller, som ble samlet fra en hundespasient diagnostisert som mesoteliom post mortem. På den tiden ble mesoteliomcellene smurt og fiksert i metanol i 10 minutter og lagret i en glassbeholder som inneholdt 1x fosfatbufret saltvann (PBS) ved 4 ℃ i flere måneder. For kalretinin- og E-cadherin-farging ble celleutstryket fra perikardial effusjon fiksert i metanol ved -20 °C i 10 minutter og vasket tre ganger med PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA) i 2 minutter. De primære antistoffene mot kalretinin (1:1000, Sigma C7479; vert: kanin; reaktivitet: menneske, mus, hund) og anti-E-cadherin, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; vert: rotte; verifisert reaktivitet: cynomolgus, hund, gris), ble fortynnet med 1% bovint serumalbumin (BSA)/PBS (Komabiotech, Seoul, Sør-Korea). Etter inkubasjon over natten med de primære antistoffene ved 4 °C ble utstryket vasket tre ganger i PBS i 2 minutter. Det sekundære antistoffet Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) geit anti-kanin immunoglobulin G (IgG; tung + lett kjede [H + L]) ble fortynnet med 1% BSA/PBS. Etter inkubasjon over natten med de sekundære antistoffene ved 4 °C ble utstryket vasket tre ganger i PBS i 2 minutter. Utstryket ble deretter kontrastfarget med monteringsmedium som inneholdt DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) og undersøkt ved hjelp av et LSM 780 laser-scanning konfokalt mikroskop (Carl Zeiss, Jena, Tyskland). For cytokeratin og vimentin farging ble det brukt monoklonalt antistoff mot pan cytokeratin (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, USA), monoklonalt antistoff mot vimentin (V9), og fluorescein (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); den samme protokollen (fargemetode eller tid som kreves) som beskrevet ovenfor ble utført ved hjelp av et annet sekundært antistoff. For desmin-farging ble desmin monoklonalt antistoff (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) brukt som et primært antistoff, og Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) geit anti-mus IgG (H + L) ble brukt som et sekundært antistoff. De samme prosedyrene som beskrevet ovenfor ble utført. Immunokjemi av perikardial væske var positiv for vimentin og cytokeratin. DAPI og det sammenslåtte bildet av figur A-C er vist i figur D. Det var også positivt for desmin. DAPI og det sammenslåtte bildet av figur E, F er vist i figur G, H. Endelig var det positivt for kalretinin og E-cadherin. DAPI og det sammenslåtte bildet av figur A-C er vist i figur D. Derfor ble malign mesoteliom diagnostisert [,, –].