Un cucciolo di Husky incrociato di 5 settimane, di sesso maschile, è stato presentato al servizio di emergenza del Centro Medico Veterinario (VMC) dell'Università di Saskatchewan con una storia di un giorno di comportamento neurologico anomalo che includeva cerchi, atassia, vocalizzazione e ottundimento mentale. Al momento della presentazione il cucciolo aveva un ottundimento mentale, non presentava segni di minaccia bilaterale, rispondeva normalmente alla luce, aveva un riflesso faringeo e non presentava altri deficit dei nervi cranici. Il cucciolo girava a sinistra e aveva un'andatura atassica. Non ci sono stati altri significativi riscontri neurologici. La localizzazione neuroanatomica suggeriva lesioni multifocali del sistema nervoso centrale nel proencefalo e nel tronco encefalico. La locale società per la protezione degli animali aveva ricevuto la madre e i suoi 8 cuccioli dal Northern Saskatchewan; la madre era stata vaccinata all'arrivo nel rifugio. I cuccioli sono stati successivamente vaccinati sette giorni dopo con un vaccino vivo modificato (Nobivac 1 DAPPC, Merck Animal Health) dopo che tutti i cuccioli hanno dato esito negativo al test per il parvovirus canino con un saggio immunoenzimatico (SNAP Parvo test, IDEXX Laboratories, Markham, ON). Tutti gli altri cuccioli e la madre erano asintomatici ad eccezione di un cucciolo che si è presentato al VMC un giorno prima del cucciolo qui descritto con una storia di 3 giorni di letargia, aumento dello sforzo respiratorio e secrezione nasale sierosa bilaterale. Si sospettava un'infezione delle vie respiratorie superiori. È stato prescritto amoxicillin (Apotex Inc.; Toronto; ON) 22 mg/kg PO q12 per 10 giorni e il cucciolo è stato dimesso con istruzioni per essere immediatamente svezzato dalla madre e isolato dagli altri cuccioli. Nessuna anomalia neurologica è stata notata in questo o in qualsiasi altro cucciolo in qualsiasi momento. Questo cucciolo è stato posto in isolamento all'arrivo, in quanto si sospettava che avesse una malattia infettiva sottostante, tra cui un possibile cimurro canino. Si è ottenuto il consenso dalla società umanitaria locale per effettuare le analisi e fornire le cure di supporto. Sono stati somministrati per via endovenosa fluidi Normosol R (Hospira, Montreal, QC) a 4 ml/kg/ora e l'analgesia è stata fornita con idromorfone (Sandoz Inc., Boucherville, QC) 0.05 mg/kg IV q4. Un pannello di emergenza ha rivelato un volume corpuscolare di 22% (26.5–35.5), proteine totali di 5.8 g/dl (3.7–4.8), Azotstick® (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Tarrytown, NY) azoto ureico nel sangue di 5-15 mg/dl (13.1–46.2) e glucosio nel sangue di 10.3 mmol/l (6.7–8.9). È stata presentata anche una conta ematica completa a Prairie Diagnostic Services Inc. (PDS), che ha rivelato una moderata anemia rigenerativa; conta dei globuli rossi (RBC) 3.25 × 1012/L (5.8–8.5) e ematocrito (HCT) 0.22 L/L (0.39–0.56). È stata anche notata una moderata deviazione a sinistra con cambiamento tossico indicativo di infiammazione acuta; conta dei globuli bianchi (WBC) 10.7 × 109/L (4.9–15.4), neutrofili segmentati 8.0 × 109/L (3.0–10.0) e bande 1.0 × 109/L (0.0–0.1). I risultati delle analisi del sangue includevano intervalli di riferimento specifici per età rilevanti per questo paziente []. Le diagnosi differenziali iniziali per i segni neurologici includevano il cimurro canino, la meningite batterica, la meningite protozoica (ad esempio, toxoplasmosi) e, con minore probabilità, una possibile manifestazione insolita di rabbia. Fu iniziato un trattamento sintomatico con antibiotici ad ampio spettro, tra cui metronidazolo (Baxter, Mississauga, ON) 25 mg/kg IV q12, piperacillina (SteriMax Inc., Oakville, ON) 40 mg/kg IV lentamente nell'arco di 30 min q6 e l'intenzione di somministrare clindamicina (Intervet, Kirkland, QC) 12,5 mg/kg PO q12. La clindamicina non poteva essere somministrata in quanto il cucciolo perdeva rapidamente il riflesso faringeo e la sua capacità di pensare si deteriorava progressivamente entro le prime 4 ore successive alla presentazione. Il cucciolo perdeva e riprendeva coscienza ogni minuto e diventava insensibile agli stimoli esterni. Dopo ulteriori discussioni con la società umanitaria locale, si è deciso, per motivi di benessere e per un probabile pessimo pronostico, di eutanasizzare il cucciolo. Il cucciolo è stato eutanasizzato con pentobarbital per via endovenosa (Bimeda-MTC, Cambridge, ON) 2 ml/4,5 kg; la morte è stata confermata con l'auscultazione cardiaca. Non è stato necessario alcun ulteriore agente anestetico a causa della ottundita capacità di pensare del cucciolo. Il cucciolo è stato eutanasizzato 18 ore dopo la prima osservazione dei segni clinici. Il giorno seguente, presso il Prairie Diagnostic Services (PDS) di Saskatoon, Saskatchewan, è stata effettuata una necroscopia. Il cucciolo era in buone condizioni fisiche. I principali reperti macroscopici erano polmoni edematosi, di colore rosa screziato o rosso pallido, e un fegato di colore bruno pallido, diffusamente ingrossato. Non è stato osservato alcun edema della cistifellea. L'istopatologia è stata condotta su organi importanti tra cui cervello (cerebrum, talamo, cervelletto, ponte, midollo), polmoni, cuore, fegato, milza, occhi, midollo osseo, reni, linfonodi e intestino tenue. Sono state osservate aree di ipercellularità nel cervello centrate sui vasi e accompagnate da emorragie acute, in particolare nella corona radiata, nel nucleo caudato, nel talamo, nel ponte e nelle leptomeninghe. I vasi erano circondati e infiltrati da macrofagi e ciò era associato a edema, piccola quantità di fibrina, cellule infiammatorie necrotiche ed emorragie nello spazio di Virchow-Robbin e nelle adiacenti neuropil. Alcuni macrofagi mostravano eritrofagia. Le cellule endoteliali erano ipertrofiche e spesso contenevano un grande corpo intranucleare basofilo. Gli epatociti erano diffusamente, lievemente vacuolati e vi era una rara necrosi delle singole cellule. I nuclei degli epatociti contenevano spesso anche grandi corpi intranucleari basofili. Gli alveoli polmonari erano pieni di liquido edema, una piccola quantità di fibrina, globuli rossi e le pareti alveolari erano infiltrate in modo multifocale da macrofagi. Raramente le cellule endoteliali dei capillari interalveolari contenevano corpi intranucleari. Le cellule endoteliali contenenti questi corpi intranucleari erano comunemente osservate anche nei vasi di più organi tra cui reni, midollo osseo, linfonodi, fegato e retina. Segni di lesioni vascolari ed emorragie erano presenti in modo variabile. Le principali diagnosi istologiche definitive erano meningoencefalite con vasculite e necrosi epatica sospettata di essere da un'infezione virale basata sulla presenza dei corpi intranucleari. Le diagnosi differenziali eziologiche erano infezioni da Canid Alphaherpesvirus 1 (CaHV-1), Canine Adenovirus type 1 (CAdV) e cimurro canino (CDV). Dato che il cucciolo aveva più di 3 settimane di età, l'infezione da herpesvirus canino era considerata meno probabile. Immunoistochimica per Adenovirus, CDV e Rabia è stata condotta sul tessuto cerebrale. I risultati sono stati positivi per Adenovirus e negativi per CDV e Rabia. CDV è stato, comunque, rilevato da PCR a trascrizione inversa (IDEXX Laboratories) in un campione di sangue intero raccolto prima dell'eutanasia. La colorazione immunoistochimica sia per il CAdV che per il CDV è stata effettuata sui tessuti cerebrali al PDS su una piattaforma automatica di colorazione (Autostainer Plus, Dako Canada Inc., Mississauga, ON). È stata effettuata una colorazione epitopica indotta dal calore e sono stati utilizzati gli anticorpi primari (anticorpo anti-CAdV di capra, Virostat, Portland, ME e anticorpo anti-CDV (clone DV2-12), Custom Monoclonals International, West Sacramento, CA) con una diluizione di 1:4000. Un reagente bloccante avidina/biotina (Vector Labs; Burlingame, CA) è stato applicato prima dell'anticorpo anti-CAdV. Il legame dell'anticorpo anti-CAdV è stato rilevato utilizzando anticorpi anti-immunoglobuline di capra (Vector Labs; Burlingame, CA) e un reagente complesso avidina-biotina-perossidasi immunologica (Vector Labs; Burlingame, CA), e il legame dell'anticorpo anti-CDV è stato rilevato utilizzando un reagente di rilevamento polimero marcato con HRP (EnVision+ System - HRP Labelled Polymer, Dako Canada Inc., Mississauga, ON). La colorazione è stata visualizzata utilizzando il tetraidrocloruro di 3,3'-diamminobenzidina (DAB) (Dako Canada Inc., Mississauga, ON) come cromogeno. Gli antigeni CDV non sono stati rilevati. Tuttavia, sono state osservate numerose cellule con forte colorazione citoplasmatica e nucleare per gli antigeni CAdV all'interno delle cellule endoteliali, confermando l'infezione da epatite canina Ulteriori colorazioni immunoistochimiche sono state effettuate presso il Veterinary Diagnostic Laboratory dell'Università del Minnesota per effettuare colorazioni specifiche per distinguere tra CAdV-1 e CAdV-2. I risultati hanno indicato che poche cellule endoteliali avevano una reattività immunologica positiva per il CAdV-1. La colorazione IHC per il CAdV-2 è stata negativa. Il follow-up della cucciolata ha rivelato che nessuno degli altri 7 cuccioli ha sviluppato segni neurologici e il cucciolo con segni respiratori si è completamente ripreso con gli antibiotici. La madre e i cuccioli sono stati tenuti in osservazione presso la società umanitaria per 2 mesi prima di essere adottati. Il controllo di tutti i cuccioli 5 mesi dopo ha rivelato che tutti i cuccioli stavano bene, senza problemi di salute attuali.