Un paziente di 73 anni è stato indirizzato dal suo dentista di base per una valutazione più approfondita di una lesione biancastra sulla gengiva e della relativa peri-implantite. Una panoramica mostra una perdita ossea alveolare generalizzata e depositi di calcoli nella regione peri-impianto (n. 42, n. 43, n. 44), e la zona anteriore e premorale della mandibola destra mostrava una perdita ossea cristica peri-impianto. I risultati di laboratorio erano entro i limiti normali. Sono state escluse diverse altre situazioni di elevazione di proteine oncogene, tra cui il consumo di tabacco e/o alcol, la mancanza di carenze nutrizionali, la mancanza di esposizione a radiazioni ionizzanti, la mancanza di immunodeficienza o immunosoppressore e altre irritazioni da protesi rimovibili. Una lesione biancastra è stata asportata e il campione è stato inviato a un patologo orale. La superficie dell'impianto contaminato è stata trattata con un laser. La diagnosi patologica è stata confermata come candidosi orale. Il paziente è stato sottoposto a trattamento laser tre volte per trattare la lesione peri-implantite. Un anno dopo, il suo impianto di n. 42, n. 43 e n. 44 è stato rimosso a causa della peri-implantite presso la clinica locale. Dalla lettera di riferimento della clinica locale, il sistema di impianto era di tipo a connessione di attrito interno con superficie SLA, installato da oltre 10 anni. Circa 3 anni dopo l'operazione laser, è stata identificata una massa sporgente sul lato linguale dell'area #43 e #44. È stata eseguita una biopsia incisionale e diagnosticata come SCC. Sono stati effettuati ulteriori esami, tra cui analisi di laboratorio, radiografia del torace, ECG, MRI, TAC con mezzo di contrasto, PET-TAC e ecografia del collo. Al paziente è stata diagnosticata una fase IVA cT4aN2cM0 secondo il sistema di stadiazione TNM proposto dall'American Joint Committee on Cancer (AJCC, 2018). È stato immediatamente programmato un intervento che comprendeva dissezione selettiva del collo, resezione massiccia con mandibulectomia marginale e ricostruzione con lembo libero dell'avambraccio radiale. Il rapporto patologico finale è stato di carcinoma a cellule squamose ben differenziato, con dimensioni del tumore di 1,5 × 2,0 cm, assenza di metastasi in nessuno dei 27 linfonodi regionali e margine di resezione chirurgica chiaro. Non sono state osservate invasioni vascolari e perineurali; pertanto, è stata diagnosticata una fase I pT1N0M0. In particolare, le cellule tumorali sono comparse sulla superficie del tessuto molle mucoso prima di penetrare in profondità lungo i fili dell'impianto. Al paziente non è stata somministrata né radioterapia né chemioterapia adiuvante. Un linfonodo metastatico è stato trovato al livello ipsilaterale destro IV su una TAC potenziata effettuata 4 mesi dopo l'intervento. È stata eseguita una dissezione selettiva del collo, incluso il livello IV destro, e una nuova lesione sospetta di natura maligna è stata trovata sul mascellare destro. La lesione del mascellare del paziente è stata confermata come SCC mediante biopsia incisionale; pertanto, egli è stato sottoposto a un ulteriore intervento chirurgico 13 giorni dopo la seconda dissezione selettiva del collo. Il sangue del paziente è stato raccolto preoperativamente, 10 giorni postoperativamente e 3 mesi postoperativamente. Dopo la precipitazione a temperatura ambiente, i campioni sono stati centrifugati a 4000 rpm per 20 min. Solo i supernatanti sono stati raccolti e miscelati con tampone di lisi e utilizzati per IP-HPLC. Abbiamo applicato 100 μg di ciascun estratto proteico alla procedura di immunoprecipitazione utilizzando una colonna di agarosio con proteina A/G (Amicogen Co., Corea). Le colonne di agarosio con proteina A/G sono state preincubate separatamente con 1 μg di ciascuno dei 20 diversi antisieri, tra cui p53, muc1, muc4, TGF-β1, survivin, Wnt1, E-cadherin, β-catenina, matrix metalloproteinase (MMP)-3, MMP-10, TNFα, HER1, HER2, PAI-1, NRAS, KRAS, CEA, Met, FASL e ERb. In breve, i campioni di proteine sono stati miscelati con 5 ml di tampone di legame (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM vanadato di sodio, 0.2 mM PMSF e 0.5% NP-40) e incubati nelle colonne di agarosio con proteina A/G a 10 °C per 1 h. Le colonne sono state poste su un agitatore rotante durante l'incubazione. Dopo aver lavato ciascuna colonna con una quantità sufficiente di soluzione PBS (pH 7.3, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 43 mM Na2HPO4-7H2O e 1.4 mM KH2PO4), la proteina bersaglio è stata eluita con 150 μl di tampone di eluizione di IgG (Pierce Co., USA). Le proteine immunoprecipitate sono state analizzate mediante HPLC (1100 series®, Agilent, USA) utilizzando una colonna a fase inversa e un sistema di rivelazione microanalitico (SG Hightech Co., Corea), azionato con una soluzione di NaCl 0.15 M e 20% di acetonitrile a 0.4 ml/min per 30 min, e analizzato tramite spettroscopia UV a 280 nm. Nei risultati IP-HPLC, le aree dei picchi delle proteine campione ottenute dall'analisi HPLC nel controllo negativo sono state utilizzate per eliminare l'area del picco dell'anticorpo (mAU*s) [–]. Per confrontare le proteine sieriche preoperative e postoperative, le aree dei picchi delle proteine sono state proporzionalmente normalizzate dal valore di a-tubulina e rappresentate come una barra. Sono stati preparati estratti di proteine da tessuto tumorale, 100 μg di ciascun estratto di proteina per la procedura di immunoprecipitazione, utilizzando una colonna di agarosio con proteina A/G. Le colonne di agarosio con proteina A/G sono state preincubate individualmente con 1 μg di ciascuno dei 9 diversi antisieri, tra cui TNFα, NRAS, HER2, Met, E-caderina, p53, survivina, TGF-β1 e NFκB. In breve, i campioni di proteine sono stati miscelati con 5 ml di tampone di legame (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM vanadato di sodio, 0.2 mM PMSF e 0.5% NP-40) e incubati nelle colonne di agarosio con proteina A/G a 10 °C per 1 ora. Per confrontare la proteina del tessuto normale della gengiva e quella del tessuto SCC, i valori di picco di area della proteina sono stati normalizzati proporzionalmente al valore di a-tubulina e rappresentati come una barra. Sono stati raccolti i risultati di routine di laboratorio, tra cui conta completa delle cellule del sangue (CBC) con conta differenziale, livelli di proteina C-reattiva (CRP) e velocità di sedimentazione eritrocitaria (ESR). Un modesto aumento della CRP plasmatica nell'intervallo osservato in individui apparentemente sani è un forte predittore di futuri eventi vascolari []. Chen et al. [] hanno riferito che la presenza di livelli elevati di CRP sierica preoperatoria (> 5,0 mg/L) è un indicatore prognostico indipendente di cancro orale. I risultati dei test dei campioni di sangue sono stati confrontati tra la prima visita, preoperatoria, postoperatoria e al momento della recidiva. Le analisi IP-HPLC hanno rivelato che p53, E-caderina, β-catenina, MMP-10, HER2, NRAS, Met ed ERb erano diminuiti al decimo giorno postoperatorio. Altri marcatori proteici correlati alla segnalazione oncogenica erano aumentati al decimo giorno postoperatorio. Ciò suggerisce che le proteine oncogene, come p53, E-caderina, β-catenina, MMP-10, HER2, NRAS, Met ed ERb, erano state rilasciate dal tumore primario; pertanto, i livelli sierici di queste proteine oncogene erano diminuiti dopo l'intervento chirurgico ablativo del tumore, la conta assoluta dei neutrofili (ANC), la VES e la CRP erano elevati immediatamente dopo l'intervento. La CRP non è stata condotta prima dell'intervento, e quindi questi dati non possono essere confrontati con altri momenti temporali; tuttavia, i livelli di CRP non erano cambiati significativamente prima e dopo il secondo intervento (dissezione selettiva del collo di livello IV, File supplementare: Figura S1). In particolare, la conta della VES era elevata nel periodo preoperatorio, come determinato quando una lesione maligna è stata confermata da biopsia incisionale e confrontata con un campione prelevato alla prima visita. Ciò indica che alcune reazioni infiammatorie possono influenzare il potenziale di trasformazione maligna. I cambiamenti perioperativi nelle RBC, nell'emoglobina e nell'ematocrito hanno mostrato che i livelli erano diminuiti durante il periodo post-chirurgico, ma tendevano a recuperare nel tempo (File aggiuntivo: Figura S2). La proporzione di neutrofili segmentati è aumentata immediatamente dopo l'intervento chirurgico, che sono cellule caratteristiche di reazioni infiammatorie acute, perché si sono spostate sulla ferita chirurgica immediatamente dopo il trauma in diversi minuti. Le curve grafiche dei livelli di linfociti, monociti, eosinofili e basofili hanno mostrato tendenze opposte rispetto ai livelli di neutrofili segmentati (File aggiuntivo: Figura S3).