Una femmina di Yorkshire Terrier di 10 anni, sterilizzata, del peso di 2,1 kg, si è presentata in un ospedale locale con dispnea. La presenza di liquido pericardico è stata confermata con l'ecografia, che è stata poi raccolta sotto guida ecografica, e le proprietà fisiche e chimiche del liquido pericardico sono state esaminate per determinarne le caratteristiche. I test di coltura batterica e fungina hanno dato risultati negativi, indicando che non vi era crescita. Non sono state riscontrate anomalie nel conteggio completo del sangue e nella chimica del siero. Il paziente è stato indirizzato al Kangwon National University Veterinary Teaching Hospital. Sono stati raccolti complessivamente 30 ml di liquido pericardico dall'area in cui è stato osservato sotto guida ecografica con anestesia locale; è stato somministrato per via endovenosa 1 mg/kg (0,2 ml) di alfaxalone, seguito da un ulteriore 0,1 ml. Dopo 10-15 minuti, sono stati somministrati 4 ml di lidocaina al 2% diluita in soluzione salina (1:1). Il versamento pericardico sanguinante è stato spalmato e è stato eseguito un esame citologico. Nell'esame citologico, sono stati osservati binucleazione, anisocitosi, anisocarioi, nucleoli anomali (grandi, angolari e multipli), abbondante citoplasma basofilo, elevato rapporto nucleare-citoplasmatico (N:C) e cromatina grossolana, nonché grandi cellule multinucleate atipiche, che indicano una neoplasia di alto grado. Queste cellule possono essere trovate sia come singole che come ammassi di aggregati con un certo numero di eritrociti. Numerosi neutrofili e macrofagi non degenerativi sono stati osservati accanto a queste cellule. È stata osservata eritrofagia, che indica un'emorragia cronica. Distinguere tra cellule mesoteliali reattive e mesotelioma nel fluido pericardico è difficile, soprattutto in presenza di infiammazione ricca di neutrofili. Pertanto, l'autore ha cercato di scoprire se le cellule osservate erano cellule mesoteliali reattive, mesotelioma o adenocarcinoma tramite immunocitochimica utilizzando cinque marcatori (citocheratina, vimentina, desmina, E-caderina e calretinina) [, –] L'immunocitochimica è stata eseguita modificando il metodo raccomandato dai produttori di anticorpi; le cellule di mesotelioma come controllo positivo per ciascuno degli anticorpi primari sono state preparate da cellule di striscio conservate, che sono state raccolte da un cane paziente a cui era stato diagnosticato il mesotelioma post mortem. A quel tempo, le cellule di mesotelioma sono state spalmate e fissate in metanolo per 10 minuti e conservate in un vaso di vetro contenente 1x soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) a 4 ℃ per diversi mesi. Per la colorazione di calretinina ed E-caderina, i campioni di cellule da effusioni pericardiche sono stati fissati in metanolo a -20 °C per 10 minuti e lavati tre volte con PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA) per 2 minuti. Gli anticorpi primari contro la calretinina (1:1000, Sigma C7479; ospite: coniglio; reattività: umana, topi, cani) e anti-E-caderina, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; ospite: ratto; reattività verificata: topo, umana; reattività riferita: cynomolgus, cane, maiale), sono stati diluiti con 1% di siero bovino (BSA)/PBS (Komabiotech, Seoul, Corea del Sud). Dopo un'incubazione di una notte con gli anticorpi primari a 4 °C, i vetrini sono stati lavati tre volte in PBS per 2 minuti. L'anticorpo secondario Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) anticorpo di capra anti-immunoglobulina G di coniglio (IgG; catena pesante + leggera [H + L]) è stato diluito con 1% di BSA/PBS. Dopo un'incubazione di una notte con gli anticorpi secondari a 4 °C, i vetrini sono stati lavati tre volte in PBS per 2 minuti. I vetrini sono stati poi colorati con un mezzo di montaggio contenente DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) ed esaminati con un microscopio a scansione laser LSM 780 (Carl Zeiss, Jena, Germania). Per la colorazione di citocheratina e vimentina, sono stati utilizzati anticorpi monoclonali di pan-citocheratina (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, USA), anticorpi monoclonali di vimentina (V9) e fluoresceina (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); lo stesso protocollo (metodo di colorazione o tempo richiesto) come descritto sopra è stato eseguito utilizzando un anticorpo secondario diverso. Per la colorazione della desmina, è stato usato come anticorpo primario l'anticorpo monoclonale della desmina (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) e come anticorpo secondario l'anticorpo di capra anti-IgG di topo (H + L) Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175). Sono state seguite le stesse procedure descritte in precedenza. L'immunocitochimica del fluido pericardico è risultata positiva per vimentina e citocheratina. DAPI e l'immagine unita di Fig. A-C sono mostrate in Fig. D. È risultata positiva anche per desmina. DAPI e l'immagine unita di Fig. E, F sono mostrate in Fig. G, H. Infine, è risultata positiva per calretinina ed E-caderina. DAPI e l'immagine unita di Fig. A-C sono mostrate in Fig. D. Pertanto, è stato diagnosticato un mesotelioma maligno [,, –].