Un otter eurasien mâle de 4 ans né en 2015 dans le « Sendaviva, Natural Park of Navarra » (42°11′31″N, 1°09′54″O) (Nord-est de l'Espagne) a été transféré au parc animalier « Terra Natura » (Sud-est de l'Espagne) en 2017. Le parc animalier « Terra Natura » est situé dans les environs périurbains de la ville de Murcie (38°00′40″N, 1°09′54″O). L'enclos des otters se composait d'une zone avec des abris en libre accès et un étang contenant 4 animaux de cette espèce (2 mâles et 2 femelles). Aucun insecticide anti-moustiques pour application par voie cutanée n'a été appliqué aux otters. En août 2019, l'animal a présenté une épistaxis bilatérale, une anorexie, une apathie et une perte de poids. L'animal a été sédaté avant manipulation avec de la medetomidine (0,2 mg/kg/i.m.) et de la kétamine (20 mg/kg/i.m.). Le sang total a été prélevé par ponction veineuse de la veine crânienne, puis drainé dans un tube de 1 ml recouvert d'acide éthylènediaminetriacétique (EDTA) et dans un tube de 1 ml sans anticoagulant pour un compte total des cellules sanguines (CBC) et des analyses biochimiques, respectivement. Le CBC a été effectué dans un compteur de cellules sanguines (ADVIA 120 Hematology System, Siemens, Italie), et les analyses biochimiques ont été effectuées dans un analyseur biochimique automatisé (Olympus AU600 Automatic Chemistry Analyzer, Olympus Europe GmbH, Hambourg, Allemagne). En outre, l'urine a été prélevée par cystocentèse guidée par ultrasons pour une analyse urinaire. Une étude échographique du cœur et des organes abdominaux, y compris les reins, la rate, le foie, la vésicule biliaire, le pancréas et le système digestif, a été effectuée. Les résultats biochimiques et échographiques étaient compatibles avec la leishmaniose clinique, des tests sérologiques et moléculaires ont été effectués pour confirmer la présence de l'infection. La présence d'anticorps anti-Leishmania IgG2 a été évaluée dans le sérum de la loutre par un test immunofluorimétrique résolu en temps (TR-IFMA) effectué comme décrit par Cantos-Barreda et al. []. Pour vérifier que le test TR-IFMA validé pour le sérum de chien pouvait être appliqué au sérum de loutre, une analyse Western blot a été réalisée. L'analyse Western blot a été réalisée dans des sérums de loutre présentant des signes compatibles avec une leishmaniose et dans un chien séropositif pour le Leishmania par TR-IFMA. Les sérums (dilution 1:2000) ont été séparés dans des conditions réductrices sur des mini gels polyacrylamide (0,1 % de dodécylsulfate de sodium (SDS), 12 % de gel de résolution et 4 % de gel de superposition). Les protéines résolues ont été transférées électrophorétiquement sur une plaque de nitrocellulose (Bio-Rad, États-Unis) et placées dans un substrat ROTI®Lumin (Carl Roth, Allemagne) pour bloquer pendant 2 h à température ambiante. L'anticorps polyclonal anti-IgG2 canin (AHP498; Bio-Rad, États-Unis) à une dilution de 1:1000 a été utilisé comme anticorps primaire, tandis que l'anticorps anti-IgG2 canine conjugué à la peroxydase de raifort (HRP) (SAB3700702; Sigma-Aldrich, États-Unis) à une dilution de 1:1000 a été utilisé comme anticorps secondaire pour détecter l'anticorps primaire lié. La détection du signal a été réalisée à l'aide d'un kit Pierce ECL2 (Pierce, Thermo Fisher Scientific, États-Unis) et a été numérisée sur un scanner Typhoon 9410 (GE Healthcare, États-Unis). Une bande d'environ 150 kDa a été observée dans l'échantillon de loutre ainsi que dans l'échantillon canin (voir figure et fichier supplémentaire). Ces résultats ont corroboré que le test TR-IFMA utilisant l'anticorps anti-IgG2 canine était capable de détecter l'IgG2 de la loutre. Le test TR-IFMA consistait en une méthode indirecte non compétitive basée sur l'antigène recombinant K39 biotinylé comme réactif de capture et l'anticorps polyclonal anti-IgG2 canine (anticorps anti-IgG2 canine, Bio-Rad, États-Unis) Eu3 +-labellé comme anticorps de détection. Le test comprenait le sérum d'un chien séropositif pour le Leishmania et le sérum d'un chien séronégatif pour le Leishmania comme contrôle positif et le sérum d'un chien séronégatif pour le Leishmania comme contrôle négatif. L'analyse a été réalisée sur un compteur multi-étiquettes (VICTOR2 1420, PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Turku, Finlande). Les résultats ont été exprimés en unités de fluorimétrie pour le Leishmania (UFL). La valeur de seuil a été fixée à 22 UFL. Une analyse immuno-enzymatique (ELISA) (Leiscan® Leishmania ELISA Test, Esteve Veterinaria, Laboratorios Dr. Esteve SA, Barcelone, Espagne) détectant des anticorps IgG spécifiques contre le Leishmania a également été réalisée, selon les instructions du fabricant. Les échantillons de sérum ont été dilués 1:20 et les résultats ont été exprimés en rapport échantillon/positif (S/P), calculé par densité optique (DO) échantillon/DO faible contrôle positif. Les valeurs de S/P supérieures à 1,1 ont été considérées comme positives. La présence de l'ADN de Leishmania spp. dans le sang total et la moelle osseuse a été évaluée par amplification de la séquence d'ADN du kinéoplasme de Leishmania spp. en utilisant une rtPCR avec des amorces et des sondes précédemment décrites []. La moelle osseuse a été prélevée par aspiration fine à l'union costo-costal et drainée dans un tube de 1 ml recouvert d'EDTA. L'ADN a été extrait en utilisant le kit de préparation de l'échantillon PCR High Pure (Roche, Allemagne), en suivant les instructions du fabricant. La rtPCR a été réalisée dans un volume final de 20 μl, comprenant 1× iTaq Universal Probes Supermix (Bio-Rad, CA, U.S.A.), 900 nM de chaque amorce, 200 nM de sonde TaqMan, 1× Exo IPC Mix, 1× Exo IPC DNA, et 50 ng d'ADN de chaque échantillon. Les paramètres de cyclage étaient: 50 °C pendant 30 s, 95 °C pendant 10 min, 45 cycles à 94 °C pendant 30 s, et 55 °C pendant 1 min. Chaque cycle d'amplification comprenait des contrôles positifs et négatifs, et chaque mesure a été réalisée en triplicat. Pour l'identification des espèces de Leishmania, les produits PCR des échantillons positifs ont été purifiés en utilisant le kit de purification de produit PCR High Pure (Roche, Allemagne) et soumis à séquençage à la section de biologie moléculaire de l'université de Murcie. Les séquences obtenues ont été comparées à celles disponibles dans GenBank. En outre, comme contrôle négatif, les mêmes analyses ont été effectuées sur une loutre eurasienne de 3 ans du même parc animalier, qui ne présentait aucun signe clinique compatible avec la leishmaniose. Tous les résultats apparaissent dans le tableau. La présence de leishmaniose a été confirmée, et un traitement spécifique a été administré (allopurinol 15 mg/kg/24 h/p.o.). La surveillance du traitement a été effectuée en novembre 2019, après 3 mois de traitement. Une néphropathie bilatérale avec hydronéphrose, une lymphadénomégalie mésentérique et une ascite ont été observées. La formule sanguine a révélé une diminution des globules blancs et des plaquettes chez la loutre positive à la leishmaniose. Le profil biochimique sérique de la loutre positive à la leishmaniose a montré une hyperprotéinémie, une hyperglobulinémie, une diminution de la PON-1 et une augmentation de l'haptoglobine et de la ferritine. L'analyse d'urine a révélé une protéinurie et une diminution de l'osmolarité et du poids spécifique. La présence d'anticorps IgG2 anti-leishmania et un résultat positif par RT-PCR en termes de sang total et de moelle osseuse ont été observés chez la loutre positive à la leishmaniose. Le séquençage des échantillons positifs a confirmé l'identification de L. infantum. La séquence amplifiée a présenté une similarité de 100 % avec une séquence de référence de L. infantum. En outre, des microorganismes ovales avec un noyau excentrique compatible avec les amastigotes de L. spp. ont été observés dans la cytologie de la rate (Fig.