Une femelle de 10 ans, Yorkshire Terrier, pesant 2,1 kg, présentée à un hôpital local avec dyspnée. La présence de liquide péricardique a été confirmée par ultrasons, qui a ensuite été recueilli sous guidage échographique, et les propriétés physiques et chimiques du liquide péricardique ont été examinées pour déterminer ses caractéristiques. Les tests de culture bactérienne et fongique ont donné des résultats négatifs, indiquant qu'il n'y avait pas de croissance. Il n'y avait pas d'anomalies dans le compte sanguin complet et la chimie du sérum. Le patient a été envoyé à l'hôpital universitaire vétérinaire de l'université nationale de Kangwon. Au total, 30 ml de liquide péricardique ont été collectés dans la région où il a été observé sous guidage échographique avec anesthésie locale; 1 mg/kg (0,2 ml) d'alfaxalone a été administré par voie intraveineuse, suivi d'un supplément de 0,1 ml. Après 10 à 15 minutes, 4 ml de lidocaïne à 2 % diluée dans une solution saline (1:1) ont été administrés. Une effusion péricardique sanglante a été étalée et un examen cytologique a été effectué. L'examen cytologique a révélé une binucléation, une anisocytose, une anisokaryose, des nucléoles anormaux (grands, anguleux et multiples), un cytoplasme basophile abondant, un rapport nucléaire-cytoplasmique élevé (N:C) et une chromatine grossière, ainsi que de grandes cellules multinucléées atypiques, indiquant une malignité de haut grade. Ces cellules peuvent être observées individuellement ou en grappes avec un certain nombre d'érythrocytes. De nombreux neutrophiles et macrophages non dégénératifs ont été observés à côté de ces cellules. Une érythrophagie a été observée, indiquant une hémorragie chronique. La distinction entre les cellules mésothéliales réactives et le mésothéliome dans le liquide péricardique est difficile, en particulier en présence d'une inflammation riche en neutrophiles. L'auteur a donc cherché à savoir si les cellules observées étaient des cellules mésothéliales réactives, des cellules de mésothéliome ou des cellules d'adénocarcinome, au moyen d'une immunocytochimie utilisant cinq marqueurs (cytokératine, vimentine, desmine, E-cadhérine et calrétine) [, –] L'immunocytochimie a été réalisée en modifiant la méthode recommandée par les fabricants d'anticorps; des cellules de mésothéliome ont été préparées comme contrôle positif pour chacun des anticorps primaires à partir de cellules de frottis conservées, qui avaient été collectées chez un chien atteint de mésothéliome après sa mort. À ce moment-là, les cellules de mésothéliome ont été étalées et fixées dans du méthanol pendant 10 minutes et conservées dans un bocal en verre contenant du sérum physiologique tamponné au phosphate (PBS) à 4 °C pendant plusieurs mois. Pour la coloration de la calretine et de l'E-cadhérine, les frottis de péricarde ont été fixés dans du méthanol à -20 °C pendant 10 minutes et lavés trois fois avec du PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA) pendant 2 minutes. Les anticorps primaires contre la calretine (1:1000, Sigma C7479; hôte: lapin; réactivité: humain, souris, chien) et anti-E-cadhérine, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; hôte: rat; réactivité vérifiée: souris, humain; réactivité rapportée: cynomolgus, chien, porc), ont été dilués avec 1 % de sérum bovin albumine (BSA)/PBS (Komabiotech, Séoul, Corée du Sud). Après une incubation d'une nuit avec les anticorps primaires à 4 °C, les lames ont été rincées trois fois dans du PBS pendant 2 minutes. L'anticorps secondaire Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) anticorps de chèvre anti-rabbit immunoglobuline G (IgG; chaîne lourde + légère [H + L]) a été dilué avec 1 % de sérum bovin albumine (BSA)/PBS. Après une incubation d'une nuit avec les anticorps secondaires à 4 °C, les lames ont été rincées trois fois dans du PBS pendant 2 minutes. Les lames ont ensuite été contre-colorées avec un milieu de montage contenant du DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) et examinées à l'aide d'un microscope confocal à balayage laser LSM 780 (Carl Zeiss, Jena, Allemagne). Pour la coloration de la cytokératine et de la vimentine, on a utilisé l'anticorps monoclonal pan cytokératine (AE1/AE3), l'eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, USA), l'anticorps monoclonal vimentine (V9) et la fluorescéine (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); le protocole (méthode de coloration ou temps requis) décrit ci-dessus a été appliqué en utilisant un anticorps secondaire différent. Pour la coloration de la desmine, l'anticorps monoclonal de la desmine (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) a été utilisé comme anticorps primaire, et l'anticorps secondaire était l'anticorps de chèvre anti-IgG de souris (H + L) Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175). Les mêmes procédures que celles décrites ci-dessus ont été appliquées. L'immunocytochimie du liquide péricardique était positive pour la vimentine et la cytokératine. La DAPI et l'image fusionnée des Fig. A-C sont présentées dans la Fig. D. Elle était également positive pour la desmine. La DAPI et l'image fusionnée des Fig. E, F sont présentées dans les Fig. G, H. Enfin, elle était positive pour la calrétinine et l'E-cadhérine. La DAPI et l'image fusionnée des Fig. A-C sont présentées dans la Fig. D. Par conséquent, un mésothéliome malin a été diagnostiqué [,, –].