Una hembra de 2.1 kg, de 10 años de edad, Yorkshire Terrier, se presentó en un hospital local con disnea. La presencia de fluido pericárdico se confirmó en una ecografía, que luego se recolectó bajo guía ecográfica, y se examinaron las propiedades físicas y químicas del fluido pericárdico para determinar sus características. Las pruebas de cultivo bacteriano y fúngico arrojaron resultados negativos, lo que indica que no hubo crecimiento. No hubo anormalidades en el recuento sanguíneo completo y la química sérica. El paciente fue derivado al Hospital de Enseñanza Veterinaria de la Universidad Nacional de Kangwon. Se recolectaron un total de 30 ml de fluido pericárdico del área donde se observó bajo guía de ultrasonido con anestesia local; se administró por vía intravenosa 1 mg/kg (0.2 ml) de alfaxalona, seguido por 0.1 ml adicionales. Después de 10-15 minutos, se administraron 4 ml de lidocaína al 2% diluida en solución salina (1:1). Se frotó el derrame pericárdico con sangre y se realizó un examen citológico. En el examen citológico, se observaron binucleación, anisocitosis, anisocariois, nucleolos anormales (grandes, angulares y múltiples), abundante citoplasma basófilo, alta relación nuclear-citoplasmática (N:C) y cromatina gruesa, y grandes células multinucleadas atípicas, lo que indica una neoplasia de alto grado. Estas células pueden encontrarse como individuos o como grupos de agregados con varios eritrocitos. Junto a estas células se observaron numerosos neutrófilos y macrófagos no degenerativos. Se observó eritrofagia, lo que indica una hemorragia crónica. Distinguir entre células mesoteliales reactivas y mesotelioma en el fluido pericárdico es un desafío, en especial, en presencia de una inflamación rica en neutrófilos. Por lo tanto, el autor se propuso descubrir si las células observadas eran mesoteliales reactivas, mesotelioma o células de adenocarcinoma mediante inmunocitoquímica utilizando cinco marcadores (citoqueratina, vimentina, desmina, E-cadherina y calretinina) [, –] Se realizó inmunocitoquímica modificando el método recomendado por los fabricantes de anticuerpos; se prepararon células de mesotelioma como control positivo para cada uno de los anticuerpos primarios a partir de células de frotis almacenadas, que se recolectaron de un paciente canino diagnosticado con mesotelioma post mortem. En ese momento, las células de mesotelioma se frotisaron y se fijaron en metanol durante 10 minutos y se almacenaron en un frasco de vidrio que contenía 1x solución salina tamponada con fosfato (PBS) a 4 ℃ durante varios meses. Para la tinción de calretinina y E-cadherina, se fijaron frotis de células de derrames pericárdicos en metanol a -20 °C durante 10 minutos y se lavaron tres veces con PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, EE. UU.) durante 2 minutos. Los anticuerpos primarios contra calretinina (1:1000, Sigma C7479; hospedador: conejo; reactividad: humana, ratón, perro) y anti-E-cadherina, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; hospedador: rata; reactividad verificada: mono, perro, cerdo), se diluyeron con 1% de albúmina de suero bovino (BSA)/PBS (Komabiotech, Seúl, Corea del Sur). Después de una incubación durante la noche con los anticuerpos primarios a 4 °C, los portaobjetos se enjuagaron tres veces en PBS durante 2 minutos. El anticuerpo secundario Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) inmunoglobulina G anti-conejo de cabra (IgG; cadena pesada + ligera [H + L]) se diluyó con 1% de BSA/PBS. Después de una incubación durante la noche con los anticuerpos secundarios a 4 °C, los portaobjetos se enjuagaron tres veces en PBS durante 2 minutos. Los portaobjetos se tiñeron con un medio de montaje que contenía DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EE. UU.) y se examinaron utilizando un microscopio láser de escaneo confocal LSM 780 (Carl Zeiss, Jena, Alemania). Para la tinción de citoqueratina y vimentina, se usaron el anticuerpo monoclonal pan citoqueratina (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, EE. UU.), el anticuerpo monoclonal vimentina (V9) y la fluoresceína (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); se siguió el mismo protocolo (método de tinción o tiempo requerido) que se describió anteriormente, pero utilizando un anticuerpo secundario diferente. Para la tinción de desmina, se usó anticuerpo monoclonal de desmina (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) como anticuerpo primario y se usó IgG anti-ratón de cabra Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) como anticuerpo secundario. Se realizaron los mismos procedimientos que los descritos anteriormente. La inmunocitoquímica del fluido pericárdico fue positiva para vimentina y citoqueratina. DAPI y la imagen fusionada de las Fig. A-C se presentan en la Fig. D. También fue positiva para desmina. DAPI y la imagen fusionada de las Fig. E, F se muestran en las Fig. G, H. Finalmente, fue positiva para calretinina y E-cadherina. DAPI y la imagen fusionada de las Fig. A-C se muestran en la Fig. D. Por lo tanto, se diagnosticó mesotelioma maligno [,, –].