Ένα 5 εβδομάδων αρσενικό κουτάβι, διασταύρωσης χάσκυ, παρουσιάστηκε στην υπηρεσία επειγόντων περιστατικών του Κτηνιατρικού Ιατρικού Κέντρου του Πανεπιστημίου του Σασκάτσουαν με ιστορικό ενός ημερών από μη φυσιολογική νευρολογική συμπεριφορά που περιλάμβανε κυκλική κίνηση, αταξία, φωνή και αμβλύνοια. Κατά την παρουσίαση το κουτάβι είχε ακατάλληλη αμβλύνοια, απουσία απειλής διμερώς, φυσιολογική αντίδραση στο φως της κόρης, παρουσία αντανακλαστικού εμετού και δεν υπήρχαν άλλες ελλείψεις των κρανιακών νεύρων. Το κουτάβι έκανε κυκλική κίνηση προς τα αριστερά και είχε αταξική βάδιση. Δεν υπήρχαν άλλα σημαντικά νευρολογικά ευρήματα. Η νευροανατομική θέση ήταν ενδεικτική πολυκεντρικών βλαβών του κεντρικού νευρικού συστήματος εντός του πρόσθιου εγκεφάλου και του εγκεφαλικού στελέχους. Η τοπική φιλοζωική οργάνωση είχε λάβει τη μητέρα και τα 8 κουτάβια της από το Βόρειο Σασκάτσουαν. Η μητέρα εμβολιάστηκε κατά την άφιξή της στο καταφύγιο. Τα κουτάβια εμβολιάστηκαν επτά ημέρες αργότερα με τροποποιημένο ζωντανό εμβόλιο (Nobivac 1 DAPPC, Merck Animal Health) αφού όλα τα κουτάβια είχαν εξεταστεί αρνητικά για τον παραγρίπη των σκύλων με μια δοκιμασία ανοσοπροσρόφησης με σύνδεση ενζύμου (SNAP Parvo test, IDEXX Laboratories, Markham, ON). Όλα τα άλλα κουτάβια και η μητέρα ήταν ασυμπτωματικά με την εξαίρεση ενός αδελφού που παρουσιάστηκε στο VMC μία ημέρα πριν από το κουτάβι που αναφέρθηκε εδώ με ιστορικό λήθαργου, αυξημένης αναπνευστικής προσπάθειας και διμερούς ορώδους ρινικής εκκρίσεως. Υπήρχε υποψία για λοίμωξη του ανώτερου αναπνευστικού συστήματος. Συνταγογραφήθηκε αμοξικιλλίνη (Apotex Inc.; Τορόντο, Οντάριο) 22 mg/kg PO q12 για 10 ημέρες και το κουτάβι αποβλήθηκε με οδηγίες να απογαλακτιστεί αμέσως από τη μητέρα και να απομονωθεί από τα άλλα κουτάβια. Δεν σημειώθηκε νευρολογική ανωμαλία σε αυτό ή σε οποιοδήποτε από τα άλλα κουτάβια σε οποιοδήποτε σημείο. Αυτό το κουτάβι τοποθετήθηκε σε απομόνωση κατά την άφιξη με βάση την υποψία μιας υποκείμενης μολυσματικής ασθένειας, συμπεριλαμβανομένης πιθανής νόσου του σκύλου. Η τοπική φιλοζωική οργάνωση έδωσε τη συγκατάθεσή της για τη διενέργεια διαγνωστικών εξετάσεων και την παροχή υποστηρικτικής φροντίδας. Τα φυσιολογικά διαλύματα (Hospira, Μόντρεαλ, ΚΚΚ) χορηγήθηκαν ενδοφλεβίως σε ποσότητα 4 ml/kg/ώρα. Παρέχεται αναλγησία με υδρομορφόνη (Sandoz Inc., Boucherville, ΚΚΚ) 0.05 mg/kg IV q4. Μια επείγουσα επιτροπή αποκάλυψε ένα όγκο ερυθρών αιμοσφαιρίων 22% (26.5–35.5), ολική πρωτεΐνη 5.8 g/dl (3.7–4.8), αζωτούχο άζωτο αίματος (Azottick®) (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Tarrytown, NY) 5-15 mg/dl (13.1–46.2) και γλυκόζη αίματος 10.3 mmol/l (6.7–8.9). Μια πλήρης εξέταση αίματος υποβλήθηκε επίσης στην εταιρεία Prairie Diagnostic Services Inc. (PDS), η οποία αποκάλυψε μέτρια αναγεννητική αναιμία· αριθμός ερυθρών αιμοσφαιρίων (RBC) 3.25 × 1012/L (5.8–8.5) και αιματοκρίτης (HCT) 0.22 L/L (0.39–0.56). Μια μέτρια αριστερή μετατόπιση με τοξική αλλαγή ενδεικτική οξείας φλεγμονής σημειώθηκε επίσης· αριθμός λευκών αιμοσφαιρίων (WBC) 10.7 × 109/L (4.9–15.4), ουδετερόφιλα 8.0 × 109/L (3.0–10.0) και ζώνες 1.0 × 109/L (0.0–0.1). Τα αποτελέσματα των εξετάσεων αίματος περιελάμβαναν ηλικιακά ειδικά όρια αναφοράς σχετικά με τον συγκεκριμένο ασθενή []. Οι αρχικές διαφορικές διαγνώσεις για τα νευρολογικά συμπτώματα περιλάμβαναν τον σκύλο με το δάγκειο πυρετό, τη βακτηριακή μηνιγγίτιδα, την πρωτοζωική μηνιγγίτιδα (π.χ. τοξοπλάσμωση) και, λιγότερο πιθανό, μια πιθανή ασυνήθιστη εκδήλωση της λύσσας. Ξεκίνησε συμπτωματική θεραπεία με αντιβιοτικά ευρέος φάσματος και συμπεριλάμβανε τη μετρονιδαζόλη (Baxter, Mississauga, ON) 25 mg/kg IV q12, την πιπεραζίνη (SteriMax Inc., Oakville, ON) 40 mg/kg IV αργά σε διάστημα 30 λεπτών q6 και την πρόθεση χορήγησης κλινδαμυκίνης (Intervet, Kirkland, QC) 12,5 mg/kg PO q12. Η κλινδαμυκίνη δεν μπορούσε να χορηγηθεί καθώς το κουτάβι έχασε γρήγορα την αντανακλαστική του αντίδραση καθώς η νοητική του κατάσταση επιδεινώθηκε σταδιακά μέσα στις πρώτες 4 ώρες μετά την παρουσίαση. Το κουτάβι έχανε και ξαναβρίσκατε την συνείδηση του κάθε λεπτό και έγινε μη ανταποκρινόμενο σε εξωτερικά ερεθίσματα. Μετά από περαιτέρω συζήτηση με την τοπική φιλοζωική οργάνωση αποφασίστηκε για λόγους ευημερίας και υποψίας για κακή πρόγνωση να θανατωθεί το κουτάβι. Το κουτάβι θανατώθηκε με ενδοφλέβια Πεντοβαρβιτάλη (Bimeda-MTC, Cambridge, ON) 2 ml/4.5 kg. Ο θάνατος επιβεβαιώθηκε με καρδιακή ακρόαση. Δεν απαιτήθηκε πρόσθετος αναισθητικός παράγοντας λόγω της εξασθένησης της νοητικής κατάστασης του κουταβιού. Το κουτάβι θανατώθηκε 18 ώρες μετά την πρώτη διαπίστωση των κλινικών συμπτωμάτων. Την επόμενη μέρα, πραγματοποιήθηκε νεκροψία από την εταιρεία Prairie Diagnostic Services (PDS), στο Σασκάτουν της Σασκάτσουαν. Το κουτάβι ήταν σε καλή σωματική κατάσταση. Τα σημαντικά ευρήματα ήταν οι οίδημα, οι κηλίδες από ροζ έως ανοιχτό κόκκινο στους πνεύμονες και ένα διάχυτα διευρυμένο, ανοιχτό καφέ ήπαρ. Δεν παρατηρήθηκε οίδημα της χοληδόχου κύστης. Η ιστοπαθολογία διεξήχθη σε μεγάλα όργανα συμπεριλαμβανομένου του εγκεφάλου (εγκέφαλος, θάλαμος, παρεγκεφαλίδα, μετωπικός λοβός, γέφυρα, μυελός), των πνευμόνων, της καρδιάς, του ήπατος, του σπλήνα, των οφθαλμών, του μυελού των οστών, των νεφρών, των λεμφαδένων και του λεπτού εντέρου. Περιοχές υπερ-κυτταρικότητας στον εγκέφαλο επικεντρώνονταν σε αγγεία και συνοδεύονταν από οξεία αιμορραγία, ιδιαίτερα στον κορώνα ραβδωτό, τον κερκοφόρο πυρήνα, τον θάλαμο, τη γέφυρα και τις λεπτές μεμβράνες. Τα αγγεία περιβάλλονταν και εισχωρούνταν από μακροφάγα και αυτό συσχετιζόταν με οίδημα, μικρή ποσότητα ινώδους, νεκρωτικά φλεγμονώδη κύτταρα και αιμορραγία στο χώρο του Βίρχο-Ρόμπιν και τις παρακείμενες νευρικές ίνες. Λίγα μακροφάγα εμφάνιζαν ερυθροφαγία. Τα ενδοθηλιακά κύτταρα υπερτροφούνταν και συχνά περιείχαν μεγάλο βασόφιλο ενδοπυρηνικό σώμα (Εικόνα). Τα ηπατοκύτταρα ήταν διάχυτα, ήπια κενοτοπιώδη και υπήρχε σπάνια μεμονωμένη νέκρωση κυττάρων. Οι πυρήνες των ηπατοκυττάρων περιείχαν επίσης μεγάλα βασόφιλα ενδοπυρηνικά σώματα. Οι πνευμονικοί κυψελιδικοί θύλακες γέμιζαν με οίδημα, μικρή ποσότητα ινώδους, ερυθρά αιμοσφαίρια και τα τοιχώματα των κυψελίδων είχαν διηθηθεί από μακροφάγα. Σπάνια τα ενδοθηλιακά κύτταρα των ενδοπλευρικών τριχοειδών περιείχαν ενδοπυρηνικά σώματα. Τα ενδοθηλιακά κύτταρα που περιείχαν αυτά τα ενδοπυρηνικά σώματα παρατηρούνταν επίσης σε αγγεία πολλών οργάνων συμπεριλαμβανομένων των νεφρών, του μυελού των οστών, των λεμφαδένων, του ήπατος και του αμφιβληστροειδούς. Τα σημάδια των αγγειακών βλαβών και της αιμορραγίας ήταν παρόντα με ποικίλο τρόπο. Οι κύριες τελικές ιστολογικές διαγνώσεις ήταν η μηνιγγειοεγκεφαλίτιδα με αγγειίτιδα και η ηπατική νέκρωση που πιθανολογείται ότι οφείλεται σε ιογενή λοίμωξη με βάση την παρουσία των ενδοπυρηνικών σωμάτων. Οι διαφορικές διαγνώσεις ήταν οι εξής: Canid Alphaherpesvirus 1 (CaHV-1), Canine Adenovirus type 1 (CAdV) και ο ιός της νόσου του σκύλου (CDV). Δεδομένου ότι το κουτάβι ήταν ηλικίας μεγαλύτερης των 3 εβδομάδων, η λοίμωξη από τον ιό του έρπη θεωρήθηκε λιγότερο πιθανή. Η ανοσοϊστοχημεία για τον αδενοϊό, τον CDV και τη λύσσα διεξήχθησαν σε εγκεφαλικό ιστό. Τα αποτελέσματα ήταν θετικά για τον αδενοϊό και αρνητικά για τον CDV και τη λύσσα. Ωστόσο, ο CDV ανιχνεύθηκε με PCR αντίστροφης μεταγραφής (IDEXX Laboratories) σε δείγμα ολικού αίματος που συλλέχθηκε πριν από την ευθανασία. Η ανοσοϊστοχημική χρώση για το CAdV και το CDV έγινε σε ιστούς εγκεφάλου σε PDS σε μια πλατφόρμα ανοσοχρωματισμού (Autostainer Plus, Dako Canada Inc., Mississauga, ON). Η θερμική επαγωγή της ανάκτησης του επιθέματος έγινε και τα πρωτογενή αντισώματα (αντι-CAdV κατσίκας, Virostat, Portland, ME και αντι-CDV ποντικού (κλώνος DV2-12), Custom Monoclonals International, West Sacramento, CA) χρησιμοποιήθηκαν σε αραίωση 1:4000. Ένα αντισώματα αβιτίνης/βιοτίνης (Vector Labs; Burlingame, CA) εφαρμόστηκε πριν από το αντίσωμα CAdV. Η σύνδεση του αντισώματος CAdV ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας αντι-κατσικίσια ανοσοσφαιρίνη (Vector Labs; Burlingame, CA) και ένα αντιβιοτικό ανοσοποιητικό σύμπλεγμα υπεροξειδάσης (Vector Labs; Burlingame, CA), και η σύνδεση του αντισώματος CDV ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας ένα αντιβιοτικό ανοσοποιητικό σύμπλεγμα υπεροξειδάσης (EnVision+ System - HRP Labelled Polymer, Dako Canada Inc., Mississauga, ON). Η χρώση έγινε ορατή χρησιμοποιώντας τετραχλωριούχο 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (DAB) (Dako Canada Inc., Mississauga, ON) ως χρωματογόνο. Τα αντιγόνα CDV δεν ανιχνεύθηκαν. Ωστόσο, πολλά κύτταρα με ισχυρή κυτταροπλασματική και πυρηνική χρώση για αντιγόνα CAdV παρατηρήθηκαν μέσα στα ενδοθηλιακά κύτταρα, επιβεβαιώνοντας την μολυσματική ηπατίτιδα των σκύλων (σχήμα)..) Περαιτέρω ανοσοϊστοχημική χρώση έγινε επίσης στο Πανεπιστήμιο της Μινεσότα στο Εργαστήριο Διαγνωστικής Κτηνιατρικής για να γίνει ειδική χρώση για να γίνει διάκριση μεταξύ CAdV-1 και CAdV-2. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι λίγα ενδοθηλιακά κύτταρα είχαν θετική ανοσολογική δραστικότητα για το CAdV-1. Η χρώση IHC για το CAdV-2 ήταν αρνητική. Η παρακολούθηση του απορριμματοφόρου αποκάλυψε ότι κανένα από τα άλλα 7 κουτάβια δεν εμφάνισε νευρολογικά συμπτώματα και το κουτάβι με αναπνευστικά συμπτώματα ανέκαμψε πλήρως με αντιβιοτικά. Η μητέρα και τα κουτάβια κρατήθηκαν για παρακολούθηση στην κοινωνία προστασίας των ζώων για 2 μήνες πριν υιοθετηθούν. Ο επανέλεγχος όλων των κουταβιών 5 μήνες αργότερα αποκάλυψε ότι όλα τα κουτάβια ήταν καλά, χωρίς τρέχοντα προβλήματα υγείας.