Ein 11-jähriger, intakter deutscher Schäferhund (GSD) wurde mit einer zweitägigen Vorgeschichte von plötzlich auftretender Dyspnoe und generalisierter Schwäche in die Notfallambulanz der Abteilung für Klinische Tierwissenschaften der Fakultät für Veterinärmedizin der Universität Utrecht überwiesen. Impfungen und Entwurmungen wurden regelmäßig durchgeführt. Der Hund hatte 6 Monate vor der Präsentation Südeuropa besucht. Vor dem Auftreten der klinischen Symptome wurden keine Medikamente verabreicht und es wurden keine Umweltbedingungen, die Dyspnoe verursachen könnten (z. B. Tabak, organische Lösungsmittel, Staub), gemeldet. Die körperliche Untersuchung ergab einen reaktionsfähigen, aber lethargischen Hund mit generalisierter Schwäche, schwerer Dyspnoe, zyanotischen Schleimhäuten, verlängerter kapillärer Füllungszeit, schwachen peripheren Pulsen, Tachykardie (Herzfrequenz 180 Schläge/min) und einem systolischen Murmurschwellen von 1 Grad (maximaler Punkt über dem rechten Herzspitzenapex). Bei der Lungenuntersuchung wurden scharfe Lungengeräusche festgestellt. Die Blutbild-Untersuchung (B-Zellzahl: 18,9 × 109/l; Referenzbereich 4,5–14,6 × 109/l) ergab eine leichte reife Leukozytose und einen Hämatokrit von 56 % (Referenzbereich 42–61 %). Die Biochemie ergab keine Auffälligkeiten. Die arterielle Blutgasanalyse ergab eine starke Hypoxämie (PaO2: 48,5 mm Hg; Referenzbereich 85–103 mm Hg) und eine leichte Hypokapnie (PaCO2: 27,0 mm Hg; Referenzbereich: 32–43 mm Hg). Die vermutete Ursache für die Hypokapnie war eine Hyperventilation. Die D-Dimeren- und Antithrombin-Konzentrationen lagen im Referenzbereich. Der Dirofilaria immitis-Antigen-Snap-Test (SNAP® Heartworm RT Test, IDEXX Laboratories) und die Stuhluntersuchung (Schwimm- und Larvenisolationstechnik nach Baermann) waren negativ. Die thorakalen Röntgenbilder zeigten eine Erweiterung des Pulmonalarterienstamms und eine rechtsseitige Kardiomegalie (Abb. ). Die Echokardiographie war aufgrund der starken Angst und des Keuchens des Hundes stark erschwert und daher begrenzt. Sie zeigte eine starke rechtsventrikuläre Erweiterung, eine milde gleichmäßige Erweiterung der Hauptpulmonalarterie, eine systolische Abflachung des interventrikulären Septums und eine moderate Trikuspidalinsuffizienz (Abb. a). Die Anwendung der modifizierten Bernoulli-Gleichung auf die Geschwindigkeit des Trikuspidalinsuffizienz-Jets ergab einen geschätzten systolischen Pulmonalarteriendruck von 77 mm Hg, der als schwerer PH eingestuft wurde (Referenz < 25 mm, schwerer > 75 mm Hg) ([]). Die linksventrikulären Dimensionen waren deutlich reduziert, was auf eine linksseitige Volumenverminderung hindeutete. Eine Echokardiographie mit Kochsalzlösung wurde durchgeführt, die negativ war, wodurch ein intra- und extrakardiales Rechts-Links-Shunting ausgeschlossen wurde. Um die schwere Hypoxämie und den PH zu behandeln, wurde der Hund in einen Sauerstoffkäfig mit einer eingeatmeten Sauerstoffkonzentration zwischen 40 und 50 % gesetzt. Außerdem wurden 1,5 mg/kg/8 h oral Sildenafil (Viagra®, Pfizer, New York, USA) und 0,25 mg/kg/12 h oral Pimobendan (Vetmedin®, Boehringer Ingelheim, Deutschland) verabreicht. Diese Therapie hatte keinen signifikanten Einfluss auf den klinischen Zustand des Hundes. Die arterielle Hypoxämie verbesserte sich jedoch nach dem ersten Tag der Therapie leicht (PaO2 stieg von 48,5 auf 53 mm Hg, Referenzintervall 85–103 mm Hg). Das Echokardiogramm wurde am dritten Tag der Therapie wiederholt und die echokardiographischen Veränderungen und die Schwere des PH waren deutlich reduziert. Die rechtsventrikuläre Erweiterung hatte sich dramatisch verringert, das interventrikuläre Septum war nicht mehr abgeflacht und der Druckgradient der Trikuspidalinsuffizienz war von 77 mm Hg auf 41 mm Hg (Referenz < 25 mm Hg) (Abb. b) verringert. Daher wurde die Therapie mit Pimobendan und Sildenafil während der stationären Behandlung (7 Tage) fortgesetzt. Als weitere diagnostische Schritte wurden 4 Tage nach der Erstvorstellung eine (vor- und nachkontrast-)computertomographische (CT) Untersuchung mit einer Apnoe, gefolgt von einer chirurgischen Lungenbiopsie in derselben Narkosesitzung, durchgeführt. Es wurde ein einzelner Spiral-CT-Scanner (Philips Secura, Philips NV, Eindhoven, Niederlande) verwendet. Die technischen Einstellungen umfassten 3 mm-Spiral-Slices, 120 kV, 200 mA, 292 mm-FOV, 512 × 512-Matrix und einen Algorithmus mit hoher räumlicher Frequenz. Auf den CT-Bildern zeigte sich ein subtiles zentrolobuläres Glaskörperschnürchen und eine vergrößerte Lungenarterie. Septumlinien, Pleuraerguss und Lymphadenopathie fehlten. Die CT-Befunde waren mit einer PH vereinbar, ohne dass eine abschließende Diagnose möglich war. Nach der CT-Untersuchung wurde eine Lungenbiopsie aus dem linken kranialen Lungenlappen (3 × 2 cm) zur histopathologischen Untersuchung mit einer Mini-Thorakotomie entnommen. Direkt nach diesem Verfahren wurde als letzter Ausweg eine Therapie mit Dexamethason (0,25 mg/kg i.v. q24 h Rapidexon ®, Eurovet Animal Health, Bladel, Niederlande) eingeleitet, während die histopathologischen Ergebnisse noch ausstanden (3 Tage). Die histopathologische Untersuchung der chirurgischen Lungenbiopsie ergab eine moderate chronische interstitielle histiozytäre Pneumonie unbekannter Ätiologie und Atelektase, die durch Hämatoxylin-Eosin-, Periodische Säure-Schiff- und Van-Gieson-Färbungen sichtbar wurde. Die vaskulären Veränderungen wurden zunächst nicht eindeutig identifiziert. Aufgrund der schlechten Reaktion auf die eingeleitete Behandlung und der vermuteten schlechten Prognose aufgrund der histopathologischen Ergebnisse wurde der Hund euthanasiert. Die Autopsie wurde mit dem Einverständnis des Besitzers durchgeführt. Die grossflächige Pathologie der Lunge zeigte eine mäßig kollabierte, feste Lunge mit einem diffusen, fleckigen Aussehen mit mehreren dunklen roten Herden von 1 × 1 × 3 mm und kleinen, weißen Herden von 1 × 1 × 1 mm, die oft von einer dunklen roten Zone (demarkiert) umgeben waren, die zufällig über alle Lungenlappen verteilt war. Die routinemäßige histopathologische Untersuchung der Lunge zeigte eine multifokale vaskuläre Remodellierung. Um zwischen kleinen Arterien und Venen zu unterscheiden, was für die Diagnose von PVOD wesentlich ist, wurde eine zusätzliche Färbung, die elastische Fasern und Kollagen (Weigert’s Resorcin Fuchsin) visualisiert, hinzugefügt, um elastische Lamina zu identifizieren. Bei diesem Hund, wie auch bei Menschen mit PVOD, waren alle drei Kompartimente (Arterien, Venen und Kapillaren) des pulmonalen Mikrokreislaufes betroffen, obwohl die Veränderungen im pulmonalen Venen-System am ausgeprägtesten waren. Venöse Läsionen umfassten eine starke konzentrische Intima-Proliferation, eine teilweise bis vollständige Obliteration der Lumen und eine postthrombotische Rekanalisation. Kapilläre Läsionen waren in Herden organisiert, die am deutlichsten neben umgestalteten Venolen lagen und durch eine Proliferation von plumb-endothelialen Zellen (ähnlich wie bei PCH) gekennzeichnet waren. Eine segmentale Stauung der alveolären Kapillaren war auch regelmäßig mit den Herden von PCH assoziiert. Arterielle Läsionen ähnelten denen von PAH mit einer konzentrischen Intima-Verdickung durch eine erhöhte extrazelluläre Matrix und eine mediale Hypertrophie, aber komplexe plexiforme Läsionen fehlten. Diese Befunde waren mit den Befunden von Williams et al. [] und damit mit dem menschlichen Äquivalent von PVOD konsistent. Die Genom-DNA des Falles wurde aus EDTA-Blut mit einem halbautomatischen Chemagen-Extraktionsroboter (PerkinElmer Chemagen Technologie GmbH) isoliert und bei − 20 °C gelagert. Etwa 6 Jahre später wurden die Genom-DNA des Falles und eine nicht verwandte gesunde GSD mit Whole-Genome-Sequenzierung analysiert. Die Integrität der DNA wurde mit einem Bioanalyzer (Agilent, Santa Clara, USA) überprüft und mit Qubit dsDNA HS (Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA) quantifiziert. DNA-Bibliotheken wurden mit dem TruSeq Nano Library Prep Kit (TruSeq Nano Library Prep Kit, Illumina, San Diego CA, USA) mit 200 ng gDNA-Input erstellt. Die Whole-Genome-Sequenzierungsinformationen mit 30-facher Abdeckung wurden mit einem HiSeqX Ten-Instrument (HiSeqX Ten-Instrument, Illumina, San Diego CA, USA) und 2 × 150 bp-Paired-End-Reads erhalten. Die Daten wurden mit unserer in-house entwickelten Pipeline v1.2.1 () einschließlich der Somatische-Mutation-Analyse (Strelka, VarScan, FreeBayes und MuTect) und einem Genom-Analyse-Werkzeug (GATK v. 3.2.2) [] gemäß den Best-Practice-Richtlinien [] verarbeitet. Die Sequenz-Reads wurden mit dem Burrows-Wheeler-Alignment mit maximalen exakten Übereinstimmungen (BWA-MEM) v0.7.5a [] und anschließendem Markieren von Duplikaten, Zusammenführen von Spuren und erneuten Ausrichten von Indel-Sequenzen verglichen. Eine Neuberechnung der Basen wurde nicht durchgeführt. Bei der Analyse von GSD-Patienten wurde die Mutation in BMPR2, ACVRL1, ENG, KCNK3, CAV-1 und SMAD9 als ursächliche Mutation für eine autosomal dominante Form von PAH vorgeschlagen. [] Diese Gene wurden in die Analysen einbezogen, um fehlende Kandidatensätze aufgrund einer phänotypischen Fehlklassifizierung zu verhindern. Bei der Analyse der EIF2AK4-Sequenz im Fall und bei gesunden GSD-Patienten wurden 124 eindeutige Intron-Varianten festgestellt. Bei der Analyse der EIF2AK4-Sequenz im Fall und bei gesunden GSD-Patienten wurden 196 eindeutige Intron-Varianten festgestellt. Bei der Analyse der EIF2AK4-Sequenz im Fall und bei gesunden GSD-Patienten wurden 124 eindeutige Intron-Varianten festgestellt. Bei der Analyse der EIF2AK4-Sequenz im Fall und bei gesunden GSD-Patienten wurden 124 eindeutige Intron-Varianten festgestellt. Bei der Analyse der EIF2AK4-Sequenz im Fall und bei gesunden GSD-Patienten wurden 124 eindeutige Intron-Varianten festgestellt. 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