Der Patient war ein 8-jähriger Junge, der im Alter von 6 Jahren eine allmählich fortschreitende einseitige Ptosis entwickelte, die sich im Alter von 8 Jahren und 4 Monaten zu einer beidseitigen Ptosis entwickelte. Der Patient war ein 8-jähriger Junge mit beidseitiger Ptosis. Ende Dezember 2017 entwickelte der Patient ein Fieber unbekannter Herkunft mit einer Körpertemperatur von 38,5 °C. Er erholte sich, nachdem ihm orale Antipyretika verabreicht wurden. Eine Woche nach dem Fieber erlitt der Patient einen Schlaganfall mit Dyskinesie und neigte seinen Kopf immer wieder nach links (zervikale Dyskinesie), ein Phänomen, das von Augenbewegungsstörungen begleitet wurde. Der Patient war das erste Kind, das aus einer nicht blutsverwandten Elternpaarung geboren wurde, und es gibt keine ähnlich betroffenen Familienmitglieder. Obwohl er eine „Anamnese mit angeborenen Herzkrankheiten“ aufwies, ergaben sich bei der anschließenden kardiologischen Farb-Doppler-Ultraschalluntersuchung normale Ergebnisse. Der Patient hatte keine Entwicklungsverzögerungen. Die körperliche Untersuchung ergab, dass er beidseitige Oberlidtropfen (50 % der Pupillen waren bedeckt) hatte. Außerdem hatte er eine eingeschränkte Abduktion im rechten Auge, eine Nackendystonie und eine leicht reduzierte (Grad 5-) Muskelkraft in den beiden unteren Gliedmaßen, während seine beidseitigen Knie-Reflexe verschwunden waren. Er hatte auch einen rechten Kryptorchismus und einen kleinen Penis. Er konnte weder auf einem Bein hüpfen noch hocken. Blutuntersuchungen zeigten keine auffälligen Ergebnisse. Insbesondere hatte er einen Antikörper-Spiegel von 0,82 nmol/L für den Acetylcholin-Rezeptor, während die IgG-Tests für Anti-MuSK-, Anti-Titin-Antikörper und das human low-density lipoprotein receptor-related protein 4 negativ waren. Die MRT des Gehirns zeigte diffuse Signale im Hinterhaupts-, Parietallappen und in den Basalganglien (Abbildung). Seine rechte Ptosis war besser, obwohl sie nach der Behandlung mit Prednison, Neostigmin und Omeprazol von Januar 2018 bis Oktober 2019 nicht verschwand. Sein Augenlid fiel im März 2020 wieder herunter und wurde beidseitig. Im August 2019 wurde er aufgrund wiederkehrender Kopfschmerzen ins Krankenhaus eingeliefert und reagierte nicht auf Mannitol und Carbamazepin. Der Patient war derzeit in der ersten Klasse der Grundschule mit durchschnittlichen Noten. Vollständige Exom-Bibliotheken wurden mit dem xGen Exome Research Panel v1.0 (IDT, Iowa, USA) erstellt und auf der Novaseq 6000-Plattform (Illumina, San Diego, CA, USA) sequenziert. Die Rohdaten wurden mit dem Softwarepaket fastp bereinigt. Anschließend wurden die paarweisen Enden mithilfe des Burrows-Wheeler-Aligners mit dem Referenzgenom Ensemble GRCh37/hg19 abgeglichen. Die Synonym- und kurzen Indel-Erkennung erfolgte mithilfe des Softwarepakets GATK, gefolgt von der ANNOVAR-Annotation. Die Vorhersage wurde mithilfe der Softwarepakete Provean, Sift, Polypen2_hdiv, Polypen2_hvar, Mutationtaster, M-Cap und Revel durchgeführt. Die Pathogenität aller Varianten wurde gemäß den Richtlinien des American College of Medical Genetics and Genomics interpretiert. Wir führten bei der Patientin eine CNV-Sequenzierung[] durch, eine CNV-Erkennungsmethode, die auf Hochdurchsatz-Sequenzierung basiert. Kurz gesagt, wurde das Genom-DNA zunächst mit Ultraschall auf 200-300 bp-Fragmente aufgeschnitten, dann einer Qualitätskontrolle mit Elektrophorese unterzogen. Die Enden der DNA-Fragmente wurden mit einem DNA-Reparaturenzymsystem zu stumpfen Enden verbunden, dann wurde am 3'-Ende ein einzelnes Adenin-Nukleotid hinzugefügt, um eine A-Schwanz-Überlänge zu erzeugen. Anschließend wurde das Genom mit einer ligaturvermittelten PCR für 4-6 Zyklen amplifiziert. Wir verwendeten die gleiche Sequenzierungsplattform und die gleichen Datenbereinigungsprotokolle, um CNV mit einer Länge von 100 kB und mehr mit Chigene-Softwarepaketen, die unabhängig entwickelt wurden, zu erkennen. Danach verwendeten wir Decipher, ClinVar, OMIM, DGV und ClinGen für die Annotation. Vom Patienten wurden mindestens 2 ml peripheres Blut gesammelt, und mithilfe des mitochondrialen DNA-Extraktionskits wurde mitochondriale DNA extrahiert. Die vollständige mitochondriale DNA wurde mit einer hochzuverlässigen DNA-Polymerase amplifiziert und gereinigt und mit einer Agarosegelelektrophorese visualisiert. Auf dem Novaseq6000-Sequenzierungssystem wurde eine Sequenzierung mit 150 bp-Paaren durchgeführt. Die sequenziellen Daten wurden mithilfe der Software Burrows-Wheeler Aligner mit der Referenzsequenz NC_012920 (menschliches vollständiges mitochondriales Genom, 16569 bp, zirkuläre DNA) abgeglichen. Die Varianten wurden dann in die MITOMAP-Datenbank eingepflegt, und die Pathogenität wurde mithilfe des MITOtip-Programms bestimmt. Die Ergebnisse der Sequenzierung des gesamten Exoms ergaben keine verdächtigen krankheitsverursachenden Varianten. Als nächstes verwendeten wir die CNV-Analysemethode (von Chigene entwickelt) auf die Sequenzierungsdaten des gesamten Exoms und stellten fest, dass zwei Deletionen der benachbarten Region von Chr16:15,125,591-16326688 (ca. 1,20 Mb) und 9857005-14989502 (ca. 5,13 Mb) vorliegen. Die CNV-Sequenzierungsdaten ergaben eine de novo heterozygote Deletion von Chr16:9699585-16928372 (ca. 7,23 Mb) (Abbildung). Als nächstes verglichen wir diese Region mit dem Phänotyp des zentralen Nervensystems mit zuvor dokumentierten Decipher-Patienten (Abbildung). Die mitochondriale DNA-Sequenzierung ergab negative Ergebnisse.