Ein 73-jähriger Patient wurde von seinem Zahnarzt zur weiteren Untersuchung einer weißlichen Läsion an der Gingiva und einer damit verbundenen Periimplantitis überwiesen. Eine Panoramaaufnahme zeigte einen generalisierten Alveolarknochenverlust und Kalkablagerungen im peri-implantären Bereich (Nr. 42, Nr. 43, Nr. 44), und der rechte mandibuläre Bereich zeigte einen peri-implantären krestalen Knochenverlust. Die Laborbefunde lagen im Normbereich. Weitere Situationen mit erhöhtem Gehalt an onkogenem Protein, darunter Tabak- und/oder Alkoholkonsum, keine Ernährungsdefizite, keine Befunde von ionisierender Strahlung, keine Immundefizienz oder Immunsuppressiva und andere Reizungen durch Prothesenentfernung wurden alle ausgeschlossen. Eine weißliche Läsion wurde ausgeschnitten, und die Probe wurde an einen Mundpathologen gesendet. Die kontaminierte Implantatoberfläche wurde mit einem Laser behandelt. Die pathologische Diagnose wurde als orale Candidiasis bestätigt. Der Patient wurde dreimal mit Laser gegen die Periimplantitis-Läsion behandelt. Ein Jahr später wurden seine Implantate in den Bereichen Nr. 42, Nr. 43 und Nr. 44 aufgrund von Periimplantitis in der örtlichen Klinik entfernt. Laut Überweisungsschreiben der örtlichen Klinik handelte es sich bei dem Implantatsystem um ein System mit interner Reibungsverbindung, das über 10 Jahre lang installiert war. Ungefähr 3 Jahre nach der Laseroperation wurde eine wulstige Masse auf der lingualen Seite des Bereichs #43 und #44 festgestellt. Eine incisionale Biopsie wurde durchgeführt und als SCC diagnostiziert. Weitere Untersuchungen wurden durchgeführt, darunter Laboruntersuchungen, eine Thorax-Röntgenaufnahme, ein EKG, eine MRT, ein Kontrast-CT, ein PET-CT und eine Halssonographie. Dem Patienten wurde das Stadium IVA nach dem TNM-Stadientest des American Joint Committee on Cancer (AJCC, 2018) zugewiesen. Er wurde sofort für eine Operation, die eine selektiven Halsdisektion, eine Massenresektion mit marginaler Mandibulektomie und eine Rekonstruktion mit einem strahlenfreien Unterarmlappen umfasste, eingeteilt. Der endgültige pathologische Bericht stellte ein gut differenziertes Plattenepithelkarzinom mit einem Tumor von 1,5 × 2,0 cm Größe, ohne Metastasen in den 27 regionalen Lymphknoten und mit einem klaren chirurgischen Resektionsrand fest. Vaskuläre und perineurale Invasionen wurden nicht beobachtet; daher wurde dem Patienten das Stadium pT1N0M0, Stufe I, zugewiesen. Insbesondere traten die Tumorzellen nicht an der Grenze zwischen Implantat und Knochen, sondern zuerst an der Oberfläche des weichen Schleimhautgewebes auf und drangen dann tief in die Implantatfäden ein. Weder eine adjuvante Strahlentherapie noch eine Chemotherapie wurde dem Patienten verabreicht. 4 Monate nach der Operation wurde ein metastatischer Lymphknoten auf der rechten ipsilateralen Ebene IV auf einer CT-Aufnahme gefunden. Eine selektiven Halsdissektion, einschließlich der rechten Ebene IV, wurde durchgeführt, und eine neu entwickelte Verdächtigung auf eine bösartige Läsion wurde auf der rechten Oberkieferseite gefunden. Die Oberkieferläsion des Patienten wurde durch eine Schnittbiopsie als SCC bestätigt; daher wurde 13 Tage nach der zweiten selektiven Halsdissektion eine zusätzliche Operation durchgeführt. Der endgültige pathologische Bericht über die Oberkieferläsion stellte eine gut differenzierte SCC mit einem Tumor von 2,0 × 1,4 cm Größe dar; die Tiefe der Invasion lag bei 0,7 cm. Eine Beteiligung des darunterliegenden Knochens war vorhanden. Die chirurgischen Resektionsränder waren klar. Die chirurgisch entfernten Proben wurden in 10% neutralem gepuffertem Formalin fixiert, nach einem Routineprotokoll verarbeitet und es wurden auch serielle Mikroschnitte mit verschiedenen Antiseren für die immunhistochemische Färbung vorbereitet. Alle Patientendaten wurden aus den Dateien der Abteilung für Mund- und Kieferchirurgie des Seoul National University Dental Hospital ausgewählt, nachdem der Institutional Review Board der Seoul National University (S-D20170026) seine Genehmigung erteilt hatte. Das Blut des Patienten wurde präoperativ, 10 Tage postoperativ und 3 Monate postoperativ gesammelt. Nach der Fällung bei Raumtemperatur wurden die Proben mit 4000 U/min für 20 min zentrifugiert. Nur die Überstände wurden gesammelt und mit Lysepuffer gemischt und für die IP-HPLC verwendet. Wir haben 100 μg von jedem Proteinextrakt in die Immunpräzipitation-Prozedur mit einer Protein A/G-Agarose-Säule (Amicogen Co., Korea) eingebracht. Die Protein A/G-Agarose-Säulen wurden separat mit 1 μg von jedem der 20 verschiedenen Antiseren, einschließlich p53, muc1, muc4, TGF-β1, survivin, Wnt1, E-cadherin, β-catenin, Matrixmetalloproteinase (MMP)-3, MMP-10, TNFα, HER1, HER2, PAI-1, NRAS, KRAS, CEA, Met, FASL und ERb, vorinkubiert. Kurz gesagt, die Proteinextrakt-Proben wurden mit 5 ml Bindungspuffer (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7,4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0,2 mM Natriumvanadat, 0,2 mM PMSF und 0,5 % NP-40) gemischt und in die Protein A/G-Agarose-Säulen bei 10 °C für 1 h inkubiert. Die Säulen wurden während der Inkubation auf einem Rotierenden Rührer platziert. Nach dem Waschen jeder Säule mit einer ausreichenden Menge PBS-Lösung (pH 7,3, 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 43 mM Na2HPO4-7H2O und 1,4 mM KH2PO4) wurde das Zielprotein mit 150 μl IgG-Elutionspuffer (Pierce Co., USA) eluiert. Die immunpräzipierten Proteine wurden mit einer HPLC-Anlage (1100 series®, Agilent, USA) mit einer Reversfaser-Säule und einem mikroanalytischen Detektor (SG Hightech Co., Korea) unter Verwendung einer 0,15 M NaCl- und 20 % Acetonitril-Lösung bei 0,4 ml/min für 30 min analysiert und mittels UV-Spektroskopie bei 280 nm analysiert. In den IP-HPLC-Ergebnissen wurden die Probenprotein-Spitzenflächen, die aus der HPLC-Analyse im Negativ-Kontrollserum erhalten wurden, verwendet, um die Spitzenfläche des Antikörpers (mAU*s) [–] zu eliminieren. Um das Serumprotein vor und nach der Operation zu vergleichen, wurden die Spitzenflächen der Proteine proportional zum α-Tubulin-Wert normiert und als Balken dargestellt. Protein-Extrakte wurden aus Tumorgewebe hergestellt, jeweils 100 μg Protein-Extrakt für die Immunopräzipitations-Verfahren mit einer Protein A/G-Agarose-Säule. Die Protein A/G-Agarose-Säulen wurden einzeln mit 1 μg von jeweils 9 verschiedenen Antiseren, darunter TNFα, NRAS, HER2, Met, E-Cadherin, p53, Survivin, TGF-β1 und NFκB, vorinkubiert. Kurz gesagt, die Proteinproben wurden mit 5 ml Bindungspuffer (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7,4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0,2 mM Natriumvanadat, 0,2 mM PMSF und 0,5 % NP-40) gemischt und in den Protein A/G-Agarose-Säulen bei 10 °C für 1 h inkubiert. Um die Protein-Spitzenwerte von normalem Gingiva- und SCC-Gewebe zu vergleichen, wurden die Spitzenwerte proportional mit dem α-Tubulin-Wert normalisiert und als Balken dargestellt. Es wurden routinemäßige Laborergebnisse erhoben, darunter die Gesamtzahl der Blutzellen (CBC) mit Differenzierung, C-reaktive Protein (CRP)-Werte und die Erythrozytensedimentationsrate (ESR). Eine leichte Erhöhung der CRP-Werte im Plasma, wie sie bei scheinbar gesunden Personen beobachtet wird, ist ein starker Prädiktor für zukünftige vaskuläre Ereignisse. [] Chen et al. [] berichteten, dass ein erhöhter präoperativer CRP-Wert (> 5,0 mg/L) ein unabhängiger prognostischer Indikator für Mundkrebs ist. Die Ergebnisse der Blutproben wurden vor dem Eingriff, nach dem Eingriff und zum Zeitpunkt des Wiederauftretens verglichen. Die IP-HPLC-Analysen ergaben, dass p53, E-Cadherin, β-Catenin, MMP-10, HER2, NRAS, Met und ERb am postoperativen Tag 10 abgenommen hatten. Andere Proteinmarker, die mit der onkologischen Signalisierung in Zusammenhang stehen, waren am postoperativen Tag 10 erhöht. Dies deutet darauf hin, dass onkologische Proteine, wie p53, E-Cadherin, β-Catenin, MMP-10, HER2, NRAS, Met und ERb aus dem Primärtumor freigesetzt wurden. Daher waren die Serumspiegel dieser onkologischen Proteine nach der Tumor-ablativen Operation verringert. Nach 3 Monaten postoperativ, unter Verwendung des Patientenserums, waren alle onkologischen Proteinmarker erhöht und ein Tumorrezidiv oder eine Metastase wurde vermutet. IP-HPLC-Analysen ergaben, dass NRAS, Met, p53 und NFκB im SCC-Gewebe im Vergleich der onkogenen Proteinspiegel zwischen normalem Gingiva- und SCC-Gewebe überrepräsentiert waren (Abb. Entzündungsmarker wie die Anzahl der weißen Blutkörperchen (WBC), die absolute Neutrophilenzahl (ANC), die ESR und der CRP waren unmittelbar nach dem Eingriff erhöht. Der CRP wurde vor dem Eingriff nicht bestimmt, sodass diese Daten nicht mit anderen Zeitpunkten verglichen werden können. Die CRP-Werte hatten sich jedoch vor und nach dem zweiten Eingriff nicht signifikant verändert (rechte Ebene IV, selektiven Halsdissektion, Zusatzdatei: Abbildung S1). Insbesondere die ESR-Werte waren im Vorfeld des Eingriffs erhöht, wie bei der Bestätigung einer bösartigen Läsion durch eine incisionale Biopsie festgestellt und mit einer Probe verglichen wurde, die bei dem ersten Besuch entnommen wurde. Dies deutet darauf hin, dass einige Entzündungsreaktionen das Potenzial für eine bösartige Transformation beeinflussen können. Perioperative Veränderungen in den RBCs, Hämoglobin und Hämatokrit zeigten, dass die Werte während der Nachoperation gesunken waren, aber mit der Zeit wiederhergestellt wurden (Zusatzdatei: Abbildung S2). Der Anteil der segmentierten Neutrophilen stieg unmittelbar nach der Operation an, da sie sich innerhalb weniger Minuten nach dem Trauma in Richtung der Operationswunde bewegten. Die Kurven der Lymphozyten-, Monozyten-, Eosinophil- und Basophil-Werte zeigten gegensätzliche Tendenzen zu den segmentierten Neutrophilen (Zusatzdatei: Abbildung S3).