Eine 2,1 kg schwere, kastrierte Yorkshire-Terrier-Hündin im Alter von 10 Jahren wurde mit Atemnot in ein örtliches Krankenhaus gebracht. Das Vorhandensein von Perikardialflüssigkeit wurde durch Ultraschall bestätigt, der dann unter Ultraschallführung gesammelt wurde. Die physikalischen und chemischen Eigenschaften der Perikardialflüssigkeit wurden untersucht, um ihre Merkmale zu bestimmen. Die Bakterien- und Pilzkultur-Tests ergaben negative Ergebnisse, was auf kein Wachstum hinweist. Es gab keine Anomalien im kompletten Blutbild und in der Serumchemie. Der Patient wurde an das Kangwon National University Veterinary Teaching Hospital überwiesen. Insgesamt 30 ml Perikardialflüssigkeit wurde aus dem Bereich entnommen, wo sie unter Ultraschallführung mit lokaler Anästhesie beobachtet wurde. 1 mg/kg (0,2 ml) Alfaxalon wurde intravenös verabreicht, gefolgt von weiteren 0,1 ml. Nach 10-15 min wurden 4 ml 2% Lidocain in Kochsalzlösung (1:1) verabreicht. Blutende Perikardial-Epanästhesie wurde verschmiert und ein zytologischer Befund wurde durchgeführt. Bei der zytologischen Untersuchung wurden Binucleation, Anisozytose, Anisokaryose, abnormale Nucleoli (groß, eckig und mehrfach), reichlich basophiles Zytoplasma, ein hohes nukleär-zytoplasmatisches Verhältnis (N:C) und grobes Chromatin sowie große atypische multinucleate Zellen beobachtet, die auf eine hochgradige Malignität hinweisen. Diese Zellen können einzeln oder in Gruppen mit einer Reihe von Erythrozyten vorkommen. Zahlreiche nicht degenerative Neutrophile und Makrophagen wurden neben diesen Zellen beobachtet. Eine Erythrophagie wurde beobachtet, die auf eine chronische Blutung hinweist. Die Unterscheidung zwischen reaktiven mesothelialen Zellen und Mesotheliomen in der Perikarpalsflüssigkeit ist schwierig, insbesondere bei einer neutrophilen Entzündung. Daher wollte der Autor mit Hilfe der Immunzytochemie mit fünf Markern (Zytokeratin, Vimentin, Desmin, E-Cadherin und Calretinin) herausfinden, ob es sich bei den beobachteten Zellen um reaktive mesotheliale Zellen, Mesotheliome oder Adenokarzinome handelt [, --]. Die Immunzytochemie wurde durch Modifizierung der von den Antikörperherstellern empfohlenen Methode durchgeführt. Mesotheliomazellen als positive Kontrolle für jeden der primären Antikörper wurden aus gespeicherten Abstrichzellen hergestellt, die von einem Hundekranken mit nach dem Tod diagnostiziertem Mesotheliom stammen. Zu diesem Zeitpunkt wurden die Mesotheliomazellen für 10 Minuten in Methanol verschmiert und fixiert und mehrere Monate in einem Glasgefäß mit 1x phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) bei 4℃ gelagert. Für die Färbung von Calretinin und E-Cadherin wurden Zellsuspensionen aus Perikardergüssen in Methanol bei -20 °C für 10 min fixiert und dreimal mit PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA) für 2 min gewaschen. Die Primärantikörper gegen Calretinin (1:1000, Sigma C7479; Host: Kaninchen; Reaktivität: Mensch, Maus, Hund) und E-Cadherin, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147.306; Host: Ratte; verifizierte Reaktivität: Maus, Mensch; berichtete Reaktivität: Cynomolgus, Hund, Schwein), wurden mit 1% Rinderserumalbumin (BSA)/PBS (Komabiotech, Seoul, Südkorea) verdünnt. Nach einer Übernachtinkubation mit den Primärantikörpern bei 4 °C wurden die Folien dreimal mit PBS für 2 min gewaschen. Der Sekundärantikörper Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) Ziegen-Anti-Kaninchen-Immunglobulin G (IgG; schwere + leichte Kette [H + L]) wurde mit 1% Rinderserumalbumin (BSA)/PBS verdünnt. Nach einer Übernachtinkubation mit den Sekundärantikörpern bei 4 °C wurden die Folien dreimal mit PBS für 2 min gewaschen. Die Folien wurden dann mit einem LSM 780-Laser-Scanning-Konfokalmikroskop (Carl Zeiss, Jena, Deutschland) kontrastiert und untersucht. Für die Zytokeratin- und Vimentin-Färbung wurden pan-Zytokeratin-monoklonale Antikörper (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, USA), V9-monoklonale Antikörper (V9) und Fluorescein (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82) verwendet; das gleiche Protokoll (Färbemethode oder erforderliche Zeit) wie oben beschrieben wurde mit einem anderen sekundären Antikörper durchgeführt. Für die Färbung von Desmin wurde Desmin monoklonaler Antikörper (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) als primärer Antikörper und Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) Ziegen-Anti-Maus-IgG (H + L) als sekundären Antikörper verwendet. Die gleichen Verfahren wie oben beschrieben wurden durchgeführt. Die Immunzytochemie der Perikardialflüssigkeit war positiv für Vimentin (Abb. A) und Zytokeratin (Abb. B). DAPI (Abb. C) und das zusammengeführte Bild von Abb. A-C sind in Abb. D dargestellt. Es war auch positiv für Desmin (Abb. E). DAPI (Abb. F) und das zusammengeführte Bild von Abb. E, F sind in Abb. G, H dargestellt. Schließlich war es positiv für Calretinin (Abb. A) und E-Cadherin (Abb. B). DAPI (Abb. C) und das zusammengeführte Bild von Abb. A-C sind in Abb. D dargestellt. Daher wurde ein malignes Mesotheliom diagnostiziert [,, –].