En 2,1 kg, spayed kvindelig, 10-årig Yorkshire Terrier hund blev præsenteret for et lokalt hospital med dyspnø. Tilstedeværelsen af perikardiel væske blev bekræftet på ultralyd, som derefter blev indsamlet under ultralydsvejledning, og de fysiske og kemiske egenskaber af den perikardielle væske blev undersøgt for at bestemme dens karakteristika. De bakterielle og fungale kultur tests gav negative resultater, hvilket indikerer ingen vækst. Der var ingen abnormiteter i komplet blodtal og serum kemi. Patienten blev henvist til Kangwon National University Veterinary Teaching Hospital. I alt 30 ml. af perikardiel væske blev indsamlet fra området, hvor det blev observeret under ultralydsvejledning med lokalbedøvelse; 1 mg/kg (0,2 ml) af alfaxalone blev intravenøst administreret, efterfulgt af yderligere 0,1 ml. Efter 10-15 min. blev 4 ml. af 2% lidocain fortyndet i saltvand (1:1) administreret. Blodig perikardiel effusion blev smurt og cytologisk undersøgelse blev udført. Ved cytologisk undersøgelse blev der observeret binucleation, anisocytosis, anisokaryosis, abnormale nucleoli (store, kantede og flere), rigeligt basofilt cytoplasma, højt nukleært-cytoplasmatisk forhold (N:C) og groft kromatin samt store atypiske multinucleate celler, hvilket indikerer høj grad af ondartethed. Disse celler kan findes enten som individuelle eller som klumper af aggregater med et antal erythrocytter. Der blev observeret adskillige ikke-degenerative neutrofiler og makrofager ved siden af disse celler. Erythrophagia blev observeret, hvilket indikerer kronisk blødning. Det er en udfordring at skelne mellem reaktive mesotheliale celler og mesotheliom i perikardialsvæsken, især i nærvær af neutrofil-rig inflammation. Derfor havde forfatteren til formål at finde ud af, om de observerede celler var reaktive mesotheliale, mesotheliom eller adenocarcinom celler via immuncytokemi ved hjælp af fem markører (cytokeratin, vimentin, desmin, E-cadherin og calretinin) [, –] Immunocytochemistry blev udført ved at modificere den metode, der anbefales af antistofproducenterne; mesotheliomceller som positiv kontrol for hvert af de primære antistoffer blev fremstillet fra opbevarede smøreceller, som blev indsamlet fra en hund, der var diagnosticeret med mesotheliom efter døden. På det tidspunkt blev mesotheliomcellerne smurt og fikseret i methanol i 10 minutter og opbevaret i en glaskrukke indeholdende 1x fosfatbufferet saltvand (PBS) ved 4 ℃ i flere måneder. For kalretinin- og E-cadherin-farvning blev celleudstrygningerne fra perikardial effusioner fikseret i methanol ved -20 °C i 10 minutter og vasket tre gange med PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, USA) i 2 minutter. De primære antistoffer mod kalretinin (1:1000, Sigma C7479; vært: kanin; reaktivitet: menneske, mus, hund) og anti-E-cadherin, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147.306; vært: rotte; verificeret reaktivitet: mus, menneske; rapporteret reaktivitet: cynomolgus, hund, gris), blev fortyndet med 1% bovint serumalbumin (BSA)/PBS (Komabiotech, Seoul, Sydkorea). Efter inkubation natten over med de primære antistoffer ved 4 °C blev pladerne skyllet tre gange i PBS i 2 minutter. Det sekundære antistof Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) goat anti-rabbit immunoglobulin G (IgG; heavy + light chain [H + L]) blev fortyndet med 1% BSA/PBS. Efter inkubation natten over med de sekundære antistoffer ved 4 °C blev pladerne skyllet tre gange i PBS i 2 minutter. Pladerne blev derefter kontrastfarvet med monteringsmedium indeholdende DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) og undersøgt ved hjælp af et LSM 780 laser-scanning konfokalt mikroskop (Carl Zeiss, Jena, Tyskland). Til farvning af cytokeratin og vimentin blev der anvendt pan cytokeratin monoklonalt antistof (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, USA), vimentin monoklonalt antistof (V9) og fluorescein (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); den samme protokol (farvemetode eller tid) som beskrevet ovenfor blev anvendt ved hjælp af et andet sekundært antistof. Til desmin-farvning blev desmin monoklonalt antistof (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) brugt som et primært antistof, og Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) geder anti-mus IgG (H + L) blev brugt som et sekundært antistof. Samme procedurer som beskrevet ovenfor blev udført. Immunocytochemistry af perikardial væske var positiv for vimentin og cytokeratin. DAPI og det sammensatte billede af Fig. A-C er vist i Fig. D. Det var også positivt for desmin. DAPI og det sammensatte billede af Fig. E, F er vist i Fig. G, H. Endelig var det positivt for calretinin og E-cadherin. DAPI og det sammensatte billede af Fig. A-C er vist i Fig. D. Derfor blev malignt mesotheliom diagnosticeret [,, –].