5 týdnů starý, celý křížený štěně husky bylo předvedeno na pohotovost Veterinárního lékařského centra (VMC) Univerzity Saskatchewan s jednodenní historií abnormálního neurologického chování, které zahrnovalo kroužení, ataxii, vokalizaci a obtundovanou mentální aktivitu. Při předvedení štěně mělo neobvyklou mentální aktivitu, bilaterálně chyběla hrozba, byla zaznamenána normální reakce zornice na světlo, byl přítomen gag reflex a nebyly zaznamenány žádné jiné deficity kraniocerebrálních nervů. Štěně kroužilo doleva a mělo ataxický chůzi. Nebyly zaznamenány žádné jiné významné neurologické nálezy. Neuroanatomická lokalizace naznačovala multifokální léze centrální nervové soustavy v předním mozku a mozkovém kmeni. Místní humánní společnost obdržela fenu a jejích 8 štěňat ze Severního Saskatchewanu; matka byla po příjezdu do útulku očkována. Štěňata byla následně o sedm dní později očkována modifikovanou živou vakcínou (Nobivac 1 DAPPC, Merck Animal Health) poté, co všechna štěňata byla negativní na psí parvovirus pomocí enzymatické imunoabsorpční metody (SNAP Parvo test, IDEXX Laboratories, Markham, ON). Všechna ostatní štěňata a fena byla asymptomatická s výjimkou jednoho sourozence, který byl předán VMC jeden den před štěňátkem, o němž je zde zmínka, s třídenní historií letargie, zvýšeného respiračního úsilí a bilaterálního serózního výtoku z nosu. Byla podezření na infekci horních cest dýchacích. Předepsáno bylo 22 mg/kg amoxicilinu (Apotex Inc.; Toronto; ON) perorálně každých 12 hodin po dobu 10 dnů a štěně bylo propuštěno s pokyny, aby bylo okamžitě odstaveno od matky a izolováno od ostatních štěňat. V tomto nebo v kterémkoliv jiném vrhu nebyly v žádném časovém bodě zaznamenány žádné neurologické abnormality. Toto štěně bylo po příjezdu umístěno do izolace z důvodu podezření na základní infekční onemocnění včetně možné psinky. S místním humánním sdružením byl získán souhlas k provedení diagnostiky a poskytnutí podpůrné péče. Intravenózně byly podány tekutiny Normosol R (Hospira, Montreal, QC) v dávce 4 ml/kg/h. Byla poskytnuta analgezie hydromorfonem (Sandoz Inc., Boucherville, QC) 0,05 mg/kg IV q4. Nouzový panel odhalil objem zhuštěných buněk 22 % (26,5–35,5), celkový protein 5,8 g/dl (3,7–4,8), krevní dusík urea (Azotstick®) (Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Tarrytown, NY) 5–15 mg/dl (13,1–46,2) a krevní glukóza 10,3 mmol/l (6,7–8,9). Kompletní krevní obraz byl rovněž předložen společnosti Prairie Diagnostic Services Inc. (PDS), která odhalila středně závažnou regenerační anémii; počet červených krvinek (RBC) 3,25 × 1012/L (5,8–8,5) a hematokrit (HCT) 0,22 L/L (0,39–0,56). Byl také zaznamenán středně závažný posun doleva s toxickými změnami indikujícími akutní zánět; počet bílých krvinek (WBC) 10,7 × 109/L (4,9–15,4), segmentovaných neutrofilů 8,0 × 109/L (3,0–10,0) a pásem 1,0 × 109/L (0,0–0,1). Výsledky krevních testů zahrnovaly věkově specifické referenční rozmezí relevantní pro tohoto pacienta []. Počáteční diferenciální diagnózy neurologických příznaků zahrnovaly psinku, bakteriální meningitidu, protozoální meningitidu (např. toxoplasmózu) a méně pravděpodobnou neobvyklou manifestaci vztekliny. Byla zahájena symptomatická léčba širokospektrými antibiotiky včetně metronidazolu (Baxter, Mississauga, ON) 25 mg/kg IV q12, piperacilinu (SteriMax Inc., Oakville, ON) 40 mg/kg IV pomalu po dobu 30 minut q6 a záměru podat klindamycin (Intervet, Kirkland, QC) 12,5 mg/kg PO q12. Klindamycin nebylo možné podat, protože štěně rychle ztratilo svůj gag reflex a jeho mentální stav se postupně zhoršoval během prvních 4 hodin po podání. Štěně ztrácelo a znovu nabývalo vědomí každou minutu a nereagovalo na vnější podněty. Po další diskusi s místním humánním sdružením bylo z důvodu dobrých životních podmínek a podezření na špatnou prognózu rozhodnuto o euthanizaci štěněte. Štěně bylo euthanizováno intravenózním pentobarbitalem (Bimeda-MTC, Cambridge, ON) 2 ml/4,5 kg; smrt byla potvrzena srdeční auskultací. Nebyl vyžadován žádný další anestetický prostředek kvůli obtundované mentální činnosti štěněte. Štěně bylo euthanizováno 18 hodin po prvním zaznamenání klinických příznaků. Následující den byla provedena pitva v zařízení Prairie Diagnostic Services (PDS) v Saskatoonu v Saskatchewanu. Štěně bylo v dobrém fyzickém stavu. Významné hrubé nálezy byly edematózní, skvrnité růžové až světle červené plíce a difuzně zvětšená světle hnědá játra. Nebyl zaznamenán žádný edém žlučníku. Histopatologie byla provedena na hlavních orgánech včetně mozku (mozková kůra, talamus, mozeček, pons, medulla), plic, srdce, jater, sleziny, očí, kostní dřeně, ledvin, lymfatických uzlin a tenkého střeva. Oblasti hypercelularity v mozku byly soustředěny na cévy a doprovázelo je akutní krvácení, zejména v koróně, caudálním jádru, talamu, ponsu a leptomeningeu. Cévní stěny byly obklopeny a infiltrovány makrofágy a to bylo spojeno s edémem, malým množstvím fibrinu, nekrotickými zánětlivými buňkami a krvácením ve Virchowově-Robbinově prostoru a přilehlém neuropilu. Několik makrofágů vykazovalo erytrofagii. Endoteliální buňky byly hypertrofované a často obsahovaly velké bazofilní intranukleární inkluzní tělísko (obr. ). Hepatocyty byly difuzně, mírně vakuolizované a vzácně se vyskytla individuální nekróza buněk. Jádra hepatocytů také často obsahovala velké bazofilní inkluzní tělíska. Plicní alveoly byly naplněny edémovou tekutinou, malým množstvím fibrinu, červenými krvinkami a stěny alveolů byly multifokálně infiltrovány makrofágy. Vzácně se endoteliální buňky interalveolárních kapilár obsahovaly intranukleární inkluzní tělíska. Endometeliální buňky obsahující tato intranukleární inkluzní tělíska byly také běžně nalezeny v cévách více orgánů včetně ledvin, kostní dřeně, lymfatických uzlin, jater a sítnice. Známky vaskulárního poranění a krvácení byly různě přítomné. Hlavní konečné histologické diagnózy byly meningoencefalitida s vaskulitidou a jaterní nekróza, u které se předpokládalo, že je z virové infekce na základě přítomnosti intranukleárních inkluzních tělísek. Etiologické diferenciální diagnózy byly infekce psími alfa herpesviry 1 (CaHV-1), psími adenoviry 1 (CAdV) a psím psincovým morem (CDV). Vzhledem k tomu, že štěně bylo starší než 3 týdny, infekce psími herpesviry byla považována za méně pravděpodobnou. Immunohistochemické vyšetření na adenovirus, CDV a vzteklinu bylo provedeno na mozkové tkáni. Výsledky byly pozitivní na adenovirus a negativní na CDV a vzteklinu. CDV však byla zjištěna pomocí reverzní transkripční PCR (IDEXX Laboratories) ve vzorku plné krve odebrané před eutanazií. Immunohistochemické zbarvení pro CAdV i CDV bylo provedeno na mozkových tkáních v PDS na automatizované zbarvovací platformě (Autostainer Plus, Dako Canada Inc., Mississauga, ON). Byl proveden tepelně indukovaný epitopový retrieval a primární protilátky (kočí anti-CAdV, Virostat, Portland, ME a myší anti-CDV (klon DV2–12), Custom Monoclonals International, West Sacramento, CA) byly použity v ředění 1:4000. Byl použit blokující reagent avidin/biotin (Vector Labs; Burlingame, CA) před protilátkou proti CAdV. Vazba protilátky proti CAdV byla detekována pomocí králičích protilátek proti kozím imunoglobulinům (Vector Labs; Burlingame, CA) a komplexního reagentu imunoperoxidázy s avidin-biotinovým blokujícím činidlem (Vector Labs; Burlingame, CA) a vazba protilátky proti CDV byla detekována pomocí polymerového detekčního reagentu značeného HRP (EnVision+ System - HRP Labelled Polymer, Dako Canada Inc., Mississauga, ON). Zbarvení bylo vizualizováno pomocí 3,3′-diaminobenzidinu, tetrahydrochloridu (DAB) (Dako Canada Inc., Mississauga, ON) jako chromogenu. Antigény CDV nebyly detekovány. Bylo však pozorováno mnoho buněk se silným cytoplazmatickým a jaderným zbarvením pro antigeny CAdV v rámci endoteliálních buněk, což potvrdilo infekční hepatitidu psů (obrázek). Dále bylo provedeno další imunohistochemické zbarvení na univerzitě v Minnesotě, Veterinární diagnostické laboratoři, aby bylo provedeno specifické zbarvení k rozlišení mezi CAdV-1 a CAdV-2. Výsledky ukázaly, že několik endoteliálních buněk mělo pozitivní imunoreaktivitu pro CAdV-1. IHC zbarvení pro CAdV-2 bylo negativní. Z následného sledování vrhu vyplynulo, že žádný ze 7 ostatních štěňat nevykazoval neurologické příznaky a štěně s respiračními příznaky se plně zotavilo po podání antibiotik. Matka a štěňata byly 2 měsíce před adopcí drženy v útulku pro zvířata. Opětovné vyšetření všech štěňat 5 měsíců poté ukázalo, že se všem štěňatům daří dobře a v současnosti nejsou žádné zdravotní problémy.