Un home de 74 anys es va presentar al seu metge de capçalera l'agost de 2006 queixant-se de pèrdua de memòria i va ser derivat a un neuròleg. Presentava un ràpid deteriorament cognitiu global associat a agressivitat, comportament estrany i pèrdua de llenguatge. Això va anar acompanyat d'anomia severa, desinhibició i una puntuació de 10/30 en MMSE. No hi havia signes focals, mioclònia o atàxia. El deteriorament clínic va ser molt ràpid i el desembre de 2006 es trobava en una síndrome similar a l'acinetoplàstia-mutisme amb una postura anormal. Dues ressonàncies magnètiques (MRI) del crani, l'octubre i el desembre de 2006, que incloïen seqüències T1, T2, FLAIR i DWI, van mostrar signes moderats d'atròfia cerebral però no un augment del senyal anormal cortical o dels ganglis basals. L'electroencefalograma (EEG) no va ser diagnòstic i el nivell de proteïna 14-3-3 en el líquid cefaloraquidi (CSF) era normal. El pacient va morir el març de 2007. La història familiar de demència incloïa un germà de 80 anys diagnosticat amb probable malaltia d'Alzheimer. No es van trobar mutacions en el marc de lectura obert després de seqüenciar el gen de la proteïna priònica (PRNP). Es va observar una metionina valina (MV) heterozigòtica en el codó 129. Es va observar un canvi espongiforme moderat a lleu en el neocòrtex, el putamen/globus pallidus i el tàlem, amb les lesions més evidents en el putamen i el còrtex frontal. No es van trobar vacúols confluents en cap regió. Excepte per unes poques vacúols focals en la capa molecular més profunda, el còrtex cerebel·lar no va presentar cap altra anomalia. Les neurones es van conservar en gran mesura en el còrtex cerebel·lar i els ganglis basals, encara que rares vegades es va observar una astrogliosi focal. Es va observar una microgliosi lleu a moderada en el còrtex cerebel·lar i els ganglis basals, i en la matèria blanca subcortical, respectivament. La immunotinció de PrP sense tractament previ amb proteinasa K va mostrar una forta tinció caracteritzada per dipòsits fins i puntuals (similars a sinàptics) i dipòsits granulars irregulars, sovint confluents, que es podien classificar com a sinàptics difusos. Les plaques perineuronals i cerebel·lars, les plaques de kuru i les plaques florides estaven absents. Després del tractament previ amb PK, la majoria de la tinció va desaparèixer, excepte uns pocs dipòsits granulars resistents a PK de PrP. El cerebel va mostrar un patró sinàptic discret similar en les capes molecular i granular que va desaparèixer després del tractament previ amb PK. La sensibilitat al tractament previ amb PK es va visualitzar millor en seccions consecutives amb i sense tractament previ amb PK. Les seccions paral·leles tenyides amb l'anticòs 3F4 van mostrar una reducció marcada de la immunoreactivitat de PrP, avaluada per densitometria, que implicava el 70-80% de la PrP total en les seccions de teixit. Això es va confirmar addicionalment incubant seccions de teixit amb l'anticòs 1E4 i comparant el patró immunohistoquímic de PrP d'un cas de sCJD MV1 amb el del proband. Com es mostra a la figura, la immunoreactivitat sinàptica de PrP 3F4 i 1E4 en el cas comú MV1 va mostrar una immunoreactivitat de PrP resistent. En contrast, la immunoreactivitat 3F4 i 1E4 es va abolir pràcticament després del tractament previ amb PK en el proband. A més d'aquests canvis, es van observar cabdells neurofibril·lars i pre-cabdells, així com grànuls (grans), a les escorces entorrinal i perirrinal, al subicle i a les regions CA1 i CA3 de l'hipocamp. També es van observar alguns pre-cabdells i grans a l'amígdala. Aquests canvis anaven acompanyats d'alguns dipòsits de tau hiperfosforilada en neurones del gir dentat, de cossos en espiral a la matèria blanca del lòbul temporal i d'astròcits peri-ventriculars. Es van observar neurones inflades αB-cristal·lines immunoreactives disperses a l'escorça entorrinal i a l'amígdala. La patologia tau era consistent amb la malaltia d'Alzheimer en fase III i la malaltia de grànuls argirofílics en fase 3. Les plaques amiloides i les inclusions d'α-sinucleïna estaven absents. No es van trobar anormalitats amb els anticossos anti-TDP-43. El procediment estàndard de Western blot de PrP (10% d'homogeneïtzat de cervell i concentració final de PK de 440 μg/ml) no va detectar PrPSc. L'augment del volum carregat al gel de 5 a 10 μl va produir un senyal extremadament dèbil corresponent a 24 i 19 kDa sota temps d'exposició de pel·lícula saturant. La disminució de les concentracions de PK (440, 100 i 50 μg/ml) va mostrar un augment en el senyal de PrPSc, que era suggestiu d'una proteïna priònica PK-sensible. Fins i tot així, només dues bandes de 24 i 19 kDa eren visibles. Després d'augmentar el percentatge d'homogeneïtzat de cervell al 20%, es va obtenir el mateix patró de dues bandes. Usant el kit TeSeE®, caracteritzat per condicions de digestió PK més suaus seguides per passos de purificació i concentració de la proteïna i tinció amb Sha31 Mab, es va revelar la presència de dues bandes inesperades de 21 i 16 kDa. Aquest perfil de banda es va observar en totes les regions cerebrals i va constituir un resultat sorprenent, ja que el seu pes molecular era diferent del detectat prèviament amb Mab 3F4 i 6H4. Realitzant una combinació de digestió, purificació i concentració de la mostra segons les recomanacions del kit TeSeE®, juntament amb la detecció usant 3F4 i 6H4, es va obtenir un patró nou. No només les bandes anteriors de 24, 21, 19 i 16 kDa eren presents en cada una de les mostres, sinó que també es va observar una banda molt dèbil de 28 kDa i un fragment d'una mida aproximada de 6kDa en algunes regions cerebrals. A més, es van obtenir diferències d'intensitat de senyal amb els anticossos 3F4 i 6H4 que suggerien una afinitat diferencial per PrPSc que es podria interpretar com una conformació proteica diferent en la qual l'epítop d'unió a 3F4 era més exposat que el de 6H4. L'anàlisi de la desglicosilació va revelar tres isoformes desglicosilades de 19, 16 i 6 kDa, que eren més intenses en el còrtex (parietal, frontal i temporal) i més febles en el còrtex occipital i el putamen/globus pallidus. A la regió del tàlem es van detectar dues bandes, una més intensa de 19 kDa i una més feble de 16 kDa. Finalment, el cerebel era l'única regió on s'observava una única banda desglicosilada de 19 kDa, similar a la que es troba en la MCJr de tipus 2. Tot i això, no podem descartar la possibilitat que aquesta troballa fos el resultat de la presència d'una petita quantitat de PrPSc i una subrepresentació de les altres bandes, com s'observa en el tàlem, on només es va observar una banda de mida de 16 kDa en temps d'exposició de pel·lícula més llargs. L'avaluació de la sensibilitat a la digestió de PK es va aconseguir mesurant l'absorbància de PrPSc abans i després del tractament amb proteinasa K utilitzant la prova IDEXX HerdChek BSE. Aquesta tecnologia es basa en la captura selectiva de PrPSc per un polímer químic específic a través d'interaccions poliòniques en presència de PrPC d'una mostra d'homogeneïtzat de cervell. Els valors d'absorbància disminueixen amb dilucions en sèrie, per la qual cosa es pot assumir que la quantitat de PrPSc és directament proporcional a l'absorbància. L'objectiu d'aquest protocol era realitzar una quantificació relativa de PrPSc sense tractament amb proteases. Considerem que la introducció d'una etapa de digestió podria ser útil per avaluar fàcilment la resistència relativa a la digestió de PK. Els resultats van mostrar que els valors d'absorbància van disminuir després del tractament amb PK en totes les mostres (Taula). Per a l'encefalopatia multi-infart (MIE) i la sCJD VV2, la detecció del senyal es va reduir en un 4,32% i un 2,02%, respectivament, però les reduccions no van ser estadísticament significatives. Per contra, les mostres de proband i sCJD MM1 van mostrar una reducció estadísticament significativa (p < 0,005) del senyal en un 79,82% i un 22,68%, respectivament. Els valors d'absorbància per MIE estaven per sota del tall, al mateix nivell que els controls negatius. La resta de valors estaven per sobre del tall. Aquests nivells diferenciats de reducció del senyal indiquen tres nivells de resistència a la digestió de PK: alt, intermedi i baix. Un alt nivell de resistència a la digestió de PK s'indicaria per un percentatge baix de reducció del senyal, com s'ha observat per sCJD VV2. En aquest cas, la reducció del 2% del senyal indicaria que la digestió de PK només degradaria una fracció mínima de PrPSc, suggerint així una resistència alta de la proteïna priònica anormal. La resistència intermèdia s'indicaria per un percentatge lleugerament superior de reducció del senyal, com s'ha observat per sCJD MM1, en què el 22% indicaria una fracció degradable de PrPSc superior a l'observada en el cas anterior. Això representaria un tipus de proteïna només lleugerament sensible a la degradació amb proteases, depenent de la regió del cervell. Es duen a terme més investigacions per a aclarir si aquest nivell de degradació s'associa amb el tipus de proteïna MM1 o amb un fenomen específic d'aquest individu. Finalment, la resistència baixa a la digestió de PK s'indicaria per un percentatge alt de reducció del senyal, com el 79% observat en el proband, que indicaria que una fracció alta de PrPSc és degradable. Això suggereix l'existència de tipus de proteïnes priòniques anormals extremadament susceptibles a la digestió de proteases que podrien potencialment passar-se per alt amb els mètodes de detecció basats en la resistència característica a la proteasa de la proteïna priònica patològica.