Es va derivar un pacient de 73 anys d'edat del seu dentista general per a una avaluació addicional d'una lesió blanquinosa a la geniva adherida i peri-implantitis associada. Una vista panoràmica mostrava una pèrdua d'os alveolar generalitzada i dipòsits de càlculs a la regió peri-implantària (núm. 42, núm. 43, núm. 44), i l'àrea anterior i premolar mandibular dreta mostrava una pèrdua d'os crestal peri-implantària. Les troballes de laboratori estaven dins dels límits normals. Es van excloure altres situacions d'elevació de proteïnes oncogèniques, incloent l'ús de tabac i/o alcohol, sense deficiències nutricionals, sense troballes d'exposició a radiació ionitzant, sense immunodeficiència o immunosupressor, i altres irritacions de pròtesis extraïbles. Es va extirpar una lesió blanquinosa, i la mostra es va enviar a un patòleg oral. La superfície de l'implant contaminat es va tractar amb un làser. El diagnòstic patològic es va confirmar com a candidiasi oral. El pacient es va sotmetre a tractament amb làser tres vegades per a tractar la lesió peri-implantitis. Un any després, es va extreure el seu implant de les àrees núm. 42, núm. 43, i núm. 44 a causa de peri-implantitis a la clínica local. De la carta de derivació de la clínica local, es va saber que el sistema d'implant era de tipus de connexió per fricció interna amb una superfície SLA, que s'havia instal·lat durant més de 10 anys. Uns tres anys després de l'operació làser, es va identificar una massa voluminosa al costat lingual de les àrees #43 i #44. Es va fer una biòpsia incisional i es va diagnosticar com a SCC. Es va fer un seguiment posterior que va incloure proves de laboratori, una radiografia de tòrax, un ECG, una ressonància magnètica, una tomografia computada amb contrast, una PET-CT i una ecografia del coll. Es va diagnosticar al pacient un estadi IVA de cT4aN2cM0 segons el sistema d'estadificació TNM proposat per l'American Joint Committee on Cancer (AJCC, 2018). Es va programar immediatament una operació que va incloure una dissecció selectiva del coll, una resecció massiva amb mandibulectomia marginal i una reconstrucció amb un penjoll radial de l'avantbraç. L'informe patològic final va ser un carcinoma de cèl·lules escamoses ben diferenciat, amb un tumor de 1,5 × 2,0 cm, sense metàstasi a cap dels 27 ganglis limfàtics regionals i un marge de resecció quirúrgica clar. No es van observar invasions vasculars ni perineurals; per tant, es va diagnosticar com a pT1N0M0, estadi I. Especialment, en lloc de la interfície entre l'implant i l'os, les cèl·lules tumorals es van produir a la superfície del teixit tou mucosal primer i van penetrar profundament al llarg dels fils de l'implant. No es va administrar radioteràpia adjuvant ni quimioteràpia al pacient. Es va trobar un gangli limfàtic metastàtic al nivell ipsilateral dret IV en una TC realçada presa 4 mesos després de l'operació. Es va realitzar una dissecció selectiva del coll, incloent el nivell IV dret, i es va trobar una lesió sospitosa de maligna al maxil·lar dret. La lesió del maxil·lar del pacient es va confirmar com a SCC per biòpsia incisional; per tant, es va sotmetre a una cirurgia addicional 13 dies després de la segona dissecció selectiva del coll. Es va recollir la sang del pacient abans de la cirurgia, 10 dies després de la cirurgia i 3 mesos després de la cirurgia. Després de la precipitació a temperatura ambient, les mostres es van centrifugar a 4000 rpm durant 20 min. Només es van recollir els sobrenedants i es van barrejar amb tampó de lisi i es van usar per a IP-HPLC. Es van aplicar 100 μg de cada extracte de proteïna a la immunoprecipitació usant una columna d'agarosa de proteïna A/G (Amicogen Co., Corea). Les columnes d'agarosa de proteïna A/G es van preincubar per separat amb 1 μg de cadascun dels 20 antisueros diferents, inclosos p53, muc1, muc4, TGF-β1, survivina, Wnt1, E-cadherina, β-catenina, metaloproteinasa de la matriu (MMP)-3, MMP-10, TNFα, HER1, HER2, PAI-1, NRAS, KRAS, CEA, Met, FASL i ERB. Breument, les mostres de proteïnes es van barrejar amb 5 ml de tampó d'unió (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM de vanadato de sodi, 0.2 mM PMSF i 0.5% NP-40) i es van incubar en les columnes d'agarosa de proteïna A/G a 10 °C durant 1 h. Les columnes es van col·locar en un agitador rotatori durant la incubació. Després de rentar cada columna amb una quantitat suficient de solució de PBS (pH 7.3, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 43 mM Na2HPO4-7H2O i 1.4 mM KH2PO4), la proteïna diana es va eluir amb 150 μl de tampó d'elució d'IgG (Pierce Co., EUA). Les proteïnes immunoprecipidades es van analitzar mitjançant HPLC (1100 sèries®, Agilent, EUA) usant una columna de fase inversa i un sistema detector microanalític (SG Hightech Co., Corea), operat amb una solució de 0.15 M NaCl i 20% acetonitril a 0.4 ml/min durant 30 min, i es va analitzar mitjançant espectroscòpia UV a 280 nm. En els resultats d'IP-HPLC, es van usar les àrees de pic de mostra de proteïna obtingudes de l'anàlisi de HPLC en el control negatiu per eliminar l'àrea de pic d'anticòs (mAU*s) [–]. Per comparar la proteïna sèrica preoperativa i postoperativa, es van normalitzar proporcionalment les àrees de pic de proteïna mitjançant el valor de a-tubulina i es van representar com una barra. Es van preparar extractes de proteïnes a partir de teixit tumoral, 100 μg de cada extracte de proteïna per al procediment d'immunoprecipitació utilitzant una columna d'agarosa de proteïna A/G. Les columnes d'agarosa de proteïna A/G es van preincubar individualment amb 1 μg de cadascun dels 9 antisueros diferents, inclosos TNFα, NRAS, HER2, Met, E-cadherina, p53, survivina, TGF-β1 i NFκB. Breument, les mostres de proteïnes es van barrejar amb 5 ml de tampó d'unió (150 mM NaCl, 10 mM Tris pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.2 mM vanadato de sodi, 0.2 mM PMSF i 0.5% NP-40) i es van incubar en les columnes d'agarosa de proteïna A/G a 10 °C durant 1 h. Per a comparar la proteïna normal de la geniva i la del teixit SCC, els valors de l'àrea del pic de proteïna es van normalitzar proporcionalment amb el valor de la a-tubulina i es van representar com una barra. Es van recollir els resultats de laboratori de rutina, inclosos els recomptes de cèl·lules sanguínies completes (CBC) amb recompte diferencial, els nivells de proteïna C reactiva (CRP) i la velocitat de sedimentació globular (ESR). Una elevació modesta en el CRP plasmàtic en el rang observat en individus aparentment sans és un fort predictor d'esdeveniments vasculars futurs []. Chen et al. [] van informar que la presència d'un nivell elevat de CRP sèrica preoperativa (> 5,0 mg/L) és un indicador pronòstic independent de càncer oral. Els resultats de les proves de mostres de sang es van comparar des de la primera visita, preoperativament, postoperativament i en el moment de la recurrència. Les anàlisis IP-HPLC van revelar que p53, E-cadherina, β-catenina, MMP-10, HER2, NRAS, Met, i ERb havien disminuït el dia 10 després de l'operació. Altres marcadors de proteïnes relacionades amb la senyalització oncogènica van augmentar el dia 10 després de l'operació. Això suggereix que les proteïnes oncogèniques, com ara p53, E-cadherina, β-catenina, MMP-10, HER2, NRAS, Met, i ERb es van alliberar del tumor primari; per tant, els nivells sèrics d'aquestes proteïnes oncogèniques van disminuir després de la cirurgia tumoral. Tres mesos després de l'operació, utilitzant el sèrum del pacient, tots els marcadors de proteïnes oncogèniques van augmentar i es va sospitar una recurrència del tumor o metàstasi. Les anàlisis IP-HPLC van revelar que NRAS, Met, p53 i NFκB estaven sobreexpressats en el teixit SCC en la comparació dels nivells de proteïnes oncogèniques entre la geniva normal i el teixit SCC, el recompte absolut de neutròfils (ANC), la VSG i la PCR es van elevar immediatament després de l'operació. La PCR no es va fer preoperativament, per la qual cosa aquestes dades no es poden comparar amb altres punts temporals; tanmateix, els nivells de PCR no havien canviat significativament abans i després de la segona operació (dissecció selectiva del coll dret nivell IV, arxiu addicional: figura S1). En particular, els recomptes de VSG es van elevar en el període preoperatiu, tal com es va determinar quan es va confirmar una lesió maligna mitjançant biòpsia incisional i es va comparar amb una mostra presa en la primera visita. Això indica que algunes reaccions inflamatòries poden afectar el potencial de transformació maligna. Els canvis perioperatoris en els glòbuls vermells, l'hemoglobina i l'hematòcrit van mostrar que els nivells van disminuir durant el postoperatori, però van tendir a recuperar-se amb el temps (arxiu addicional: Figura S2). La proporció de neutròfils segmentats va augmentar immediatament després de la cirurgia, que són cèl·lules característiques de reaccions inflamatòries agudes, perquè es van desplaçar a la ferida quirúrgica immediatament després del trauma en uns minuts. Les corbes graficades dels nivells de limfòcits, monòcits, eosinòfils i basòfils van mostrar tendències oposades als nivells de neutròfils segmentats (arxiu addicional: Figura S3).