Una femella de 2,1 kg, de 10 anys d'edat, Yorkshire Terrier, es va presentar a un hospital local amb dispnea. La presència de fluid pericàrdic es va confirmar en ultrasò, que després es va recollir sota guia d'ultrasò, i es van examinar les propietats físiques i químiques del fluid pericàrdic per determinar-ne les característiques. Les proves de cultiu bacterià i fúngic van donar resultats negatius, cosa que indica que no hi ha creixement. No hi va haver anormalitats en el recompte sanguini complet i la química sèrica. El pacient va ser derivat a l'Hospital Universitari de Veterinària de la Universitat Nacional de Kangwon. Es van recollir un total de 30 ml de fluid pericàrdic de la zona on es va observar sota guia d'ultrasò amb anestèsia local; es va administrar 1 mg/kg (0.2 ml) d'alfafalon intravenós, seguit d'un 0.1 ml addicional. Després de 10-15 min, es van administrar 4 ml de lidocaïna al 2% diluïda en solució salina (1:1). Es va escampar l'efusió pericàrdica amb sang i es va realitzar un examen citològic. En l'examen citològic, es van observar binucleació, anisocitosi, anisocariosi, nuclèols anormals (grans, angulars i múltiples), abundant citoplasma basòfil, alta relació nuclear-citoplasmàtica (N:C) i cromatina gruixuda, i grans cèl·lules multinucleades atípiques, que indiquen una neoplàsia de grau alt. Aquestes cèl·lules es poden trobar com a individus o com a grups agregats amb un nombre d'eritròcits. Es van observar nombrosos neutròfils i macròfags no degeneratius al costat d'aquestes cèl·lules. Es va observar eritrofagia, que indica una hemorràgia crònica. Distingir entre cèl·lules mesotelials reactives i mesotelioma en el fluid pericàrdic és un repte, especialment en presència d'inflamació rica en neutròfils. Per tant, l'autor va intentar descobrir si les cèl·lules observades eren mesotelials reactives, mesotelioma o cèl·lules d'adenocarcinoma mitjançant immunocitoquímica usant cinc marcadors (citoqueratina, vimentina, desmina, E-cadherina i calretinina) [, --] Es va realitzar immunocitoquímica modificant el mètode recomanat pels fabricants d'anticossos; es van preparar cèl·lules de mesotelioma com a control positiu per a cadascun dels anticossos primaris a partir de cèl·lules de frotis emmagatzemades, que es van recollir d'un pacient caní diagnosticat amb mesotelioma post mortem. En aquell moment, les cèl·lules de mesotelioma es van tenyir i es van fixar en metanol durant 10 minuts i es van emmagatzemar en un pot de vidre que contenia 1x solució salina tamponada amb fosfat (PBS) a 4℃ durant diversos mesos. Per a la tinció de calretinina i E-cadherina, es van fixar esmalts cel·lulars d'efusions pericardials en metanol a -20 °C durant 10 min i es van rentar tres vegades amb PBS (Sigma-Aldrich, Burlington, MA, EUA) durant 2 min. Els anticossos primaris contra calretinina (1:1000, Sigma C7479; hoste: conill; reactivitat: humana, ratolí, gos) i anti-E-cadherina, Alexa Fluor 594 (10 µg/ml, Biolegend 147,306; hoste: rata; reactivitat verificada: ratolí, humana; reactivitat notificada: macaco, gos, porc), es van diluir amb 1% d'albúmina de sèrum boví (BSA)/PBS (Komabiotech, Seül, Corea del Sud). Després d'una incubació d'una nit amb els anticossos primaris a 4 °C, els portaobjectes es van rentar tres vegades amb PBS durant 2 min. L'anticòs secundari Alexa Fluor 488 (10 µg/ml, Invitrogen, A11034) d'immunoglobulina G anti-conill de cabra (IgG; cadena pesada + lleugera [H + L]) es va diluir amb 1% de BSA/PBS. Després d'una incubació d'una nit amb els anticossos primaris a 4 °C, els portaobjectes es van rentar tres vegades amb PBS durant 2 min. Els portaobjectes es van tenyir amb un mitjà de muntatge que contenia DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA) i es van examinar utilitzant un microscopi làser d'escombrat confocal LSM 780 (Carl Zeiss, Jena, Alemanya). Per a la tinció de citoqueratina i vimentina, es van fer servir l'anticòs monoclonal pan citoqueratina (AE1/AE3), eFluor™ 570 (1 µg/ml, Invitrogen 41-9003-82, Carlsbad, CA, EUA), l'anticòs monoclonal vimentina (V9) i la fluoresceïna (1 µg/ml, Invitrogen 11-9897-82); es va seguir el mateix protocol (mètode de tinció o temps requerit) que s'ha descrit abans, però utilitzant un anticòs secundari diferent. Per a la tinció de desmina, es va fer servir l'anticòs monoclonal desmina (D33) (1:100, Invitrogen MA5-13259) com a anticòs primari, i l'anticòs de cabra anti-IgG de ratolí (H+L) Alexa Fluor 488 (1:500, Invitrogen A28175) com a anticòs secundari. Es van seguir els mateixos procediments que els descrits anteriorment. La immunocitoquímica del fluid pericardià va ser positiva per a vimentina i citoqueratina. DAPI i la imatge fusionada de Fig. A-C es mostren a la Fig. D. També va ser positiva per a desmina. DAPI i la imatge fusionada de Fig. E, F es mostren a la Fig. G, H. Finalment, va ser positiva per a calretinina i E-cadherina. DAPI i la imatge fusionada de Fig. A-C es mostren a la Fig. D. Per tant, es va diagnosticar mesotelioma maligne [,, –].